骨髓基質細胞在急性淋巴細胞白血病耐藥中的作用及機制研究.pdf

1、急性淋巴細胞性白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)是一種進行性惡性血液病,好發(fā)于兒童及成年人。近年來,隨著對疾病認識的深入及治療方案的不斷改進,ALL的預后明顯改善。然而,此病在大多數病人仍易復發(fā)及產生耐藥,整體存活率低。越來越多的證據表明ALL的復發(fā)和耐藥與骨髓微環(huán)境,如骨髓基質細胞(BMSC)對ALL細胞的保護作用有關。但白血病細胞及微環(huán)境相互作用的機制還不清楚。因此研究骨髓微環(huán)境對ALL細胞的

2、保護機制,對于提高療效乃至治愈ALL有重要作用。本研究中我們檢測了BMSC對阿糖胞苷(Ara—C)誘導的ALL細胞凋亡的保護作用,并利用各種分子生物技術,體內體外實驗研究其可能的分子機制。首先我們將Reh,RS4；11,SEMK23種ALL細胞株與人和鼠的BMSC細胞共培養(yǎng),模擬骨髓微環(huán)境,并用Ara-c誘導ALL細胞凋亡。流式細胞術檢測發(fā)現BMSC能顯著減少ALL細胞的凋亡。BMSC同樣可抑制ALL病人的原代白血病細胞的自發(fā)性凋亡及A

3、ra-C誘導的凋亡。Western blot檢測結果也證實了BMSC可逆轉Ara-C誘導的ALL細胞Caspase3,PARP,Bcl-2蛋白被剪切,同時伴有p21,Cyclin A,CDK2表達的減少。此外,BMSC還能加快ALL的細胞周期進程,促進其增殖。我們發(fā)現與BMSC共培養(yǎng)可導致Akt的磷酸化,而用PI3k抑制劑LY29400抑制Akt的磷酸化可增加ALL細胞的凋亡。但是利用CXCR4的拮抗劑AMD3100并不能抑制BMSC的

4、保護作用。為了進一步探索參與保護機制的分子,我們利用基因芯片,蛋白質芯片等,檢測了在Ara-C作用下單獨培養(yǎng)和共培養(yǎng)Reh細胞基因和蛋白表達的變化.結果表明許多的信號通路參與該過程,包括凋亡通路,細胞周期等,與上述結果相符。半定量RT-PCR驗證了顯著差異表達的基因。我們從中發(fā)現共培養(yǎng)組的Lef-1,C-myc及CyclinD1表達增加,Western blot也同樣發(fā)現了β-catenin的表達增加,提示BMSC可通過活化ALL細胞的

5、Wnt通路起到保護作用。進一步研究發(fā)現,小分子抑制劑XAV939能夠有效抑制β-catenin的表達,從而抑制共培養(yǎng)系統中ALL細胞的Wnt通路的活化,并最終逆轉BMSC對ALL細胞的保護作用,增加Ara-C誘導的細胞凋亡。此抑制劑不但作用于ALL細胞,而且作用于保護ALL細胞的BMSC。預計這種雙重作用使它可能成為將來ALL治療中與化療聯合用藥的優(yōu)先選擇。最后我們聯合Ara-C及XAV939治療Rehluc／SCID小鼠,通過持續(xù)定期