蛋白質-多糖復合納米纖維膜用于構建組織工程全層皮膚的實驗研究.pdf

1、第一部分蛋白質/多糖和蛋白質—多糖/P(LLA—CL)復合納米纖維膜用于皮膚缺損修復的實驗研究
　　 目的：通過動物實驗的方法評價絲素蛋白/殼聚糖(兩者比例為80：20)、絲素蛋白/殼聚糖(兩者比例為50：50)、絲素蛋白—殼聚糖/P(LLA—CL)(兩者比例為25：75)、膠原蛋白/殼聚糖(兩者比例為80：20)、明膠/透明質酸(兩者比例為90：10)復合納米纖維膜對于SD大鼠背部全層皮膚缺損創(chuàng)面修復的作用。
　　 方

2、法：將上述五種復合納米纖維膜材料分成五組，并將其分成兩部分完成，第一部分一、二、三組，第二部分四、五、六組進行實驗，實驗組用相應的復合納米纖維膜覆蓋在雌性SD大鼠皮膚缺損創(chuàng)面，外被油紗和紗布敷料；每組各用大鼠15只；對照組僅覆蓋油紗和紗布敷料，用大鼠15只。實驗組和對照組大鼠背部皮膚缺損的面積均為2×1．5cm2；第一部分于術后第3、7、21天，第二部分于術后第3、7、14天，每組各隨機取5只SD大鼠處死，觀察SD大鼠大體情況、創(chuàng)面情況

3、，并取創(chuàng)緣與正常創(chuàng)面組織4％甲醛固定，行石蠟包埋切片H—E染色光鏡下對比觀察。
　　 結果：與對照組相比，實驗組創(chuàng)面修復情況較對照組好，其中尤以絲素蛋白/殼聚糖(80：20)、絲素蛋白—殼聚糖/P(LLA—CL)(25：75)和膠原蛋白．殼聚糖(80：20)復合生物材料的促創(chuàng)傷修復作用更明顯。
　　 結論：絲素蛋白/殼聚糖(80：20)、絲素蛋白—殼聚糖/P(LLA—CL)(25：75)和膠原蛋白—殼聚糖(80：20)復

4、合納米纖維膜較普通生物敷料和其他兩組生物材料能更好的促進創(chuàng)傷修復、愈合，有著較好的科研和臨床應用前景。
　　 第二部分蛋白質—多糖復合納米纖維膜用于構建組織工程全層皮膚的實驗研究
　　 基于生物可降解復合納米纖維材料而設計的共培養(yǎng)體系制作的組織工程皮膚已有報道。在體外，對細胞與膠原蛋白—殼聚糖復合納米纖維材料共培養(yǎng)后，并對納米生物材料進行觀察和性能評估的實驗也已有報道。我們現(xiàn)用這種共培養(yǎng)體系將SD大鼠皮膚角質細胞和皮膚成

5、纖維細胞與膠原蛋白—殼聚糖(80：20)復合納米纖維材料共培養(yǎng)模擬全層皮膚結構建立多層組織工程復合物。首先，分離培養(yǎng)SD大鼠皮膚角質細胞和皮膚成纖維細胞，并在倒置顯微鏡下對細胞的形態(tài)進行觀察；其次，將培養(yǎng)至三至四代的SD大鼠皮膚細胞與復合生物材料共培養(yǎng)；培養(yǎng)一周后，通過掃描電鏡觀察生物材料以及細胞在材料上面的形態(tài)；通過MTT試驗評估細胞增殖與細胞在生物材料上面的增殖特性；用免疫細胞化學的方法評估細胞以及細胞在生物材料上的生長和形態(tài)。以合