構(gòu)建去細胞牛頸靜脈內(nèi)皮化實驗研究.pdf

1、目的：研究去細胞加光氧化交聯(lián)處理后牛頸靜脈血管片表面改性方法，增加組織工程血管材料內(nèi)皮細胞的黏附生長。
　　 方法：選取新鮮合適的牛頸靜脈，采用多步驟去垢劑-酶消化法脫細胞和光氧化交聯(lián)，經(jīng)處理后的牛頸靜脈脫細胞基質(zhì)是比較理想的組織工程血管支架。應用纖維連接蛋白(Fibronectin,Fn)，Ⅳ型膠原(Collagen,ColⅣ)，明膠為單獨預襯成分，纖維連接蛋白＋明膠，纖維連接蛋白＋Ⅳ型膠原＋明膠為混合預襯成分，設置磷酸緩沖液

2、體組(PBS)預襯為對照組，每組成分均以30μ1的劑量采用物理包裹法，預襯去細胞牛頸靜脈血管片54片（裁剪每片面積約1.6cm2）。每片種植人臍靜脈內(nèi)皮細胞株細胞(CRL-2480)5×105，靜態(tài)培養(yǎng)7天，取1，4，7天標本消化血管片表面細胞記數(shù)，標本切片HE染色，掃描電鏡和透射電鏡檢測，比較各處理組血管片表面細胞黏附數(shù)目，結(jié)合程度，對比不同預處理方法對增強細胞黏附性和促進生長情況的影響，探索最佳組織工程血管改性技術(shù)。
　　

3、結(jié)果：(1)細胞記數(shù)：細胞培養(yǎng)第1天，預襯組細胞數(shù)目多于對照組(p＜0.05)，預襯處理組間無明顯差別。第4-7天，混合預襯組與單一預襯組間有差別(p＜0.05)，混合預襯組內(nèi)無差別(p＞0.05)。(2)標本石蠟包埋后切片HE染色結(jié)果：第1天各組血管片表面細胞排列密集，紊亂，細胞核有堆積，部分呈雙層排布；第4天，對照組血管表面細胞疏松，有成片分布；預襯組細胞連接成片，呈單層排布。第7天，對照組和單獨預襯組細胞都較少，混合預襯組細胞鋪連

4、成片，與下方纖維結(jié)構(gòu)有連接，未出現(xiàn)表皮脫落。(3)取7天標本掃描電鏡顯示：PBS組血管片表面細胞稀疏，細胞間無橋接，與下方的纖維結(jié)構(gòu)聯(lián)結(jié)不明顯。混合預襯組鋪連成片，細胞間長梭形有橋接和突起，與去細胞的血管片纖維之間形成連接。(4)透射電鏡：可觀察到表面生長內(nèi)皮細胞與下方纖維成分有空白帶存在。
　　 結(jié)論：去細胞加光氧化處理后的牛頸靜脈血管片可生長內(nèi)皮細胞。經(jīng)過Fn，ColⅣ，明膠單獨預襯處理的血管片表面，可增強內(nèi)皮細胞黏附和貼壁