sIL-16在大腸桿菌中的表達及活性測定.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、用PCR法擴增本室保存的sIL-16 cDNA片段,選擇NdeI和XhoI兩個酶切位點定向插入含T7啟動子同時帶有6個組氨酸序列表達標簽的載體pET28a(+)中構建重組質粒pET-sIL16,得到陽性克隆后轉化大腸桿菌BL21(DE3),篩選表達菌株.觀察不同溫度下菌株經IPTG誘導表達產物可溶情況,選擇最適宜溫度進行表達.表達產物超聲碎菌,離心后上清過Ni<'2+>鏊和層析柱,根據咪唑梯度變化進行表達產物的純化.表達產物與淋巴細胞共

2、同孵育一段時間,通過流式細胞儀觀察它對細胞表面某些分子表達的影響和它對細胞生長的刺激作用.結論:從培養(yǎng)的淋巴細胞提取IL-16 RNA,經逆轉錄成cDNA后,利用高效表達載體pET28a(+)在sIL-16的N端添加了6個組氨酸的標簽,同時受控于T7啟動子的調控下,使蛋白得以高效表達并方便純化.進行低溫誘導減弱蛋白分子表面疏水基的相互作用,有利于蛋白正確折疊形成可溶性天然的空間結構.與rIL-16共孵育的PBMC表面IL-2R的表達水平

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