組織激肽釋放酶8在宮內(nèi)生長受限大鼠海馬中的表達(dá)及其意義.pdf

1、目的：用孕期全程低蛋白(6％)飲食法制造宮內(nèi)生長受限(Intrauterine growth retardation，IUGR)仔鼠腦損傷模型，觀察組織激肽釋放酶8(Neuropsin，KLK8)在海馬中的表達(dá)變化，檢測(cè)仔鼠學(xué)習(xí)記憶能力，探討IUGR發(fā)生腦損傷的機(jī)制。
　　 方法：選取健康三月齡Sprague-Dawley大鼠28只，按照雌雄1∶1的比例置于同一籠中交配。受孕成功的孕鼠隨機(jī)分為對(duì)照組和IUGR組。對(duì)照組母鼠自受孕

2、后第一天開始給予21%正常蛋白飲食，而IUGR組母鼠自受孕后第一天開始給予6%低蛋白飲食，建立IUGR仔鼠模型。兩組仔鼠生后至21日的哺乳期內(nèi)，均給予母鼠21%正常蛋白飲食喂養(yǎng)、自由飲水。21日后將母鼠與仔鼠分籠，給予兩組仔鼠21%正常蛋白飲食喂養(yǎng)、自由飲水，喂養(yǎng)至32日。選擇1日、5日、10日和21日作為觀察的4個(gè)時(shí)間點(diǎn)，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)每組有6只仔鼠，測(cè)量仔鼠體重、頭臀長、腦濕重，并對(duì)各個(gè)時(shí)間點(diǎn)仔鼠留取海馬組織，HE染色觀察1日及21日海

3、馬結(jié)構(gòu)的變化，用Western blot檢測(cè)海馬組織中組織激肽釋放酶8的表達(dá)，于26日至32日行Morris水迷宮測(cè)試，檢測(cè)仔鼠學(xué)習(xí)記憶能力。
　　 結(jié)果：1、兩組仔鼠體格生長及腦重的動(dòng)態(tài)比較：與對(duì)照組相比，1日齡IUGR仔鼠形態(tài)瘦小，體重、頭臀長及腦濕重均降低(P＜0.05)；5日齡及10日齡時(shí)體重、頭臀長及腦濕重仍落后(P＜0.05)；經(jīng)追趕生長，到21日齡時(shí)，體重、頭臀長無明顯差異(P＞0.05)，腦濕重仍低(P＜0.05

4、)。
　　 2、兩組仔鼠海馬HE染色的變化：與對(duì)照組相比，1日齡時(shí)IUGR仔鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞排列疏松、紊亂，細(xì)胞數(shù)目減少；部分細(xì)胞水腫明顯，出現(xiàn)空泡；核固縮細(xì)胞比較多，出現(xiàn)凋亡細(xì)胞。21日齡時(shí)IUGR組神經(jīng)元細(xì)胞水腫基本消失，但細(xì)胞排列仍相對(duì)疏松、紊亂，細(xì)胞數(shù)目未見明顯增多。
　　 3、兩組仔鼠海馬中組織激肽釋放酶8的表達(dá)：在四個(gè)時(shí)間點(diǎn)，1日齡時(shí)兩組仔鼠組織激肽釋放酶8的表達(dá)低,5日齡時(shí)兩組仔鼠組織激肽釋放酶8的表達(dá)增加

5、，10日齡和21日齡時(shí)兩組仔鼠組織激肽釋放酶8的表達(dá)急劇增加；與對(duì)照組相比，在四個(gè)時(shí)間點(diǎn)，IUGR仔鼠組織激肽釋放酶8的表達(dá)均低于對(duì)照組(P＜0.05)。
　　 4、Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)顯示：(1)兩組仔鼠逃避潛伏期于測(cè)試第1天至第5天逐漸縮短；第5天IUGR組逃避潛伏期明顯長于對(duì)照組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。(2)搜尋策略結(jié)果：第5天時(shí)，IUGR組和對(duì)照組成績比較有差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。(3)兩組穿越

6、平臺(tái)次數(shù)無明顯差異(P＞0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1、用6%低蛋白飲食法能建立IUGR大鼠腦損傷模型。
　　 2、IUGR仔鼠體態(tài)瘦小，腦重低，海馬神經(jīng)元細(xì)胞數(shù)目少。給予IUGR仔鼠正常喂養(yǎng)，體格上可實(shí)現(xiàn)追趕生長，但腦重、神經(jīng)元數(shù)目仍落后于正常仔鼠，并且出現(xiàn)學(xué)習(xí)能力的降低。
　　 3、IUGR仔鼠組織激肽釋放酶8在海馬中的表達(dá)量一直低于正常組仔鼠，組織敷肽釋放酶8表達(dá)的下降可能是IUGR發(fā)生腦損傷