基于SPOP(MATH)蛋白結(jié)構(gòu)的小分子抑制劑篩選與活性驗(yàn)證.pdf

1、SPOP蛋白是SCF(Skp1、Cul1和F-box) E3連接酶家族的一員,通過(guò)泛素化修飾調(diào)節(jié)多種蛋白的穩(wěn)定性及信號(hào)通路的轉(zhuǎn)導(dǎo),并參與調(diào)控了多種細(xì)胞生理進(jìn)程。SPOP蛋白在多種癌細(xì)胞系中過(guò)表達(dá)。尤其是,高達(dá)85％的腎癌細(xì)胞中都發(fā)現(xiàn)SPOP高表達(dá)。生物信息學(xué)和流行病學(xué)研究均提示 SPOP很可能作為以后新藥研發(fā)的靶點(diǎn)或疾病檢測(cè)的生物標(biāo)志物。本文詳細(xì)的介紹了目前SPOP蛋白的研究現(xiàn)況,構(gòu)建SPOP(MATH)的原核表達(dá)系統(tǒng),得到高純度蛋白及

2、高衍射分辨率的蛋白晶體,并在此基礎(chǔ)上利用計(jì)算機(jī)虛擬對(duì)接(DOCK)技術(shù)從化合物庫(kù)篩選出SPOP(MATH)蛋白的小分子化合物抑制劑。隨后通過(guò)體外分子水平的SPR和FP實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證計(jì)算機(jī)虛擬篩選出的化合物小分子化合物對(duì)SPOP(MATH)的抑制活性,并經(jīng)過(guò)細(xì)胞 CellTiter-Blue實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證小分子化合物對(duì)腎癌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。最后得到一個(gè)作用于透明腎癌細(xì)胞768-O細(xì)胞的IC50大約為50 M的一個(gè)小分子化合物,經(jīng)過(guò)進(jìn)一步改造優(yōu)化,