芋螺毒素lt14a的藥效學和藥代動力學研究.pdf

1、芋螺毒素是從海洋軟體動物芋螺分泌的毒液當中提取的一種多肽物質(zhì)。它的主要作用是幫助芋螺進行捕食，防御和生存競爭，因此必然具有高度生物活性的特點。而經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，這種神經(jīng)毒素能夠特異性的識別多種受體蛋白，并且阻斷或者影響離子通道的閉合，從而影響生理信號的產(chǎn)生和傳導。因此芋螺毒素在慢性神經(jīng)疼痛，運動障礙，帕金森病等多種神經(jīng)性疾病方面的治療領(lǐng)域中具有巨大的藥用開發(fā)潛能。 本論文研究的芋螺毒素It14a，則是從中國南海信號芋螺（Conus

2、litteratus）的cDNA文庫中得到的一種L—超家族毒素。其半胱氨酸骨架為C—C—C—C，理論上推測應該是配體門控乙酰膽堿受體的拮抗劑，與疼痛信號的產(chǎn)生傳導有關(guān)。而經(jīng)早期的研究也發(fā)現(xiàn)It14a具有相當?shù)逆?zhèn)痛活性功能，因此認為其作為潛在的神經(jīng)鎮(zhèn)痛藥物非常具有開發(fā)的價值。 為了確定其藥用效果和作用機理，本文設(shè)計和建立了多種動物學實驗方法，詳細的研究和評估了It14a的給藥途徑，藥效與時間關(guān)系，藥效與劑量關(guān)系等相關(guān)藥效學內(nèi)容。其

3、中給藥的方法包括小鼠的腹腔注射，腦室注射，鞘內(nèi)注射，使用的檢測手段包括熱板法，醋酸扭體法，Von Frey壓力刺激法等。 另外，為了更好地模擬慢性神經(jīng)性疼痛的癥狀以及實際臨床應用的鞘內(nèi)給藥模式，本文構(gòu)建了大鼠的坐骨神經(jīng)結(jié)扎模型（CCI）和蛛網(wǎng)膜下埋管模型，并在手術(shù)方法上進行了一系列的改良和創(chuàng)新。 最后作為新藥開發(fā)以及藥物臨床前評估必不可少的組成內(nèi)容，本文還研究了It14a體內(nèi)代謝的情況。而針對多肽這種特殊藥物的藥代動力學

4、研究，常規(guī)的化藥檢測方法顯得并不適用。因此本文采用了酶聯(lián)免疫的方法進行相關(guān)動力學研究。策略是首先將半抗原It14a與載體大蛋白偶聯(lián)，增加其分子量免疫原性。隨后進行多克隆抗體的制備，并且獲得能特異性識別It14a，滿足微量檢測需要的效價的抗體。最后用競爭性ELISA的方法進行血藥濃度的檢測，獲得相關(guān)藥代動力學參數(shù)。 值得一提的是，這些方法的構(gòu)建不只適用于It14a一種芋螺毒素，對其它芋螺毒素甚至別的生物毒素同樣具有參考價值。因此在