Notch3通過(guò)β-catenin通路促進(jìn)肝癌細(xì)胞自我更新機(jī)制的研究.pdf

1、[目的]
　　1.檢測(cè)Notch3在肝癌中的表達(dá)情況，初步探討Notch3對(duì)肝癌細(xì)胞的分化、化療敏感性、生存能力的影響。
　　2.明確Notch3與β-catenin信號(hào)通路之間的相互作用，闡明Notch3通過(guò)β-catenin信號(hào)通路參與肝癌細(xì)胞干性特征維持的機(jī)制。
　　3.為研究肝癌細(xì)胞自我更新機(jī)制提供理論依據(jù)。
　　[方法]
　　1.收集臨床肝癌病人的癌和癌旁組織樣本以及相應(yīng)的病例資料。
　　2

2、.Q-RT-PCR檢測(cè)臨床樣本中Notch通路相關(guān)基因(Notch1-4，jagged2，Hes1)表達(dá)。
　　3.Western-blot、免疫組化檢測(cè)肝癌樣本中Notch3、β-catenin以及干性相關(guān)基因蛋白的表達(dá)。
　　4.培養(yǎng)并篩選出高表達(dá)Notch3的肝癌細(xì)胞系，通過(guò)siRNA轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞系沉默Notch3的mRNA表達(dá)。
　　5.運(yùn)用流式細(xì)胞分析、FACS方法篩選出陽(yáng)性表達(dá)Notch3的肝癌細(xì)胞。

3、>　　6.ALDH分析法檢測(cè)篩選出的Notch3陽(yáng)性細(xì)胞和Notch3敲低的肝癌細(xì)胞的干性。
　　7.MTT法、克隆形成法研究Notch3沉默對(duì)肝癌細(xì)胞的化療敏感性、生存能力的影響。
　　[結(jié)果]
　　1.Notch3、Hes1基因在肝癌組織樣本中明顯高表達(dá)，其中Notch3表達(dá)率為71.8％，Hes1表達(dá)率為78.1％，且Notch3與Hes1之間存在正相關(guān)性。
　　2.Notch3與腫瘤分化程度負(fù)相關(guān)，與AF

4、P濃度呈正相關(guān)，而AFP濃度與腫瘤分化程度呈負(fù)相關(guān)，Notch3高表達(dá)則預(yù)后較差。
　　3.肝癌組織樣本中Notch3與β-catenin表達(dá)相反。腫瘤干性基因Myc、Oct4在肝癌組織樣本中無(wú)表達(dá)，而Nanog表達(dá)明顯增加且與Nocth3表達(dá)特征相符。
　　4.Notch3在肝癌細(xì)胞系QGY7701和HepG2中明顯高表達(dá);沉默Notch3mRNA后的QGY7701和HepG2細(xì)胞中β-catenin表達(dá)上調(diào)而Nanog表

5、達(dá)下調(diào)。
　　5.Notch3陽(yáng)性細(xì)胞中Nanog蛋白明顯增加，而敲出Notch3后Nanog陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量減少;Notch3陽(yáng)性細(xì)胞培養(yǎng)7天后Notch3表達(dá)逐漸降低;ALDH在QGY7701中活性較高，而敲出Notch3后活性則減弱。
　　6.敲出Notch3后的QGY7701和HepG2細(xì)胞對(duì)順鉑有較高的敏感性且克隆形成能力減弱。
　　[結(jié)論]
　　1.Notch3參與肝癌的發(fā)生發(fā)展;Notch3高表達(dá)導(dǎo)致H

6、es1基因表達(dá)上調(diào);Notch3可作為判斷肝癌的潛在標(biāo)志物。
　　2.Notch3能夠反映肝癌分化程度和肝癌預(yù)后。
　　3.Notch3負(fù)調(diào)控β-catenin信號(hào)通路;Notch3可能通過(guò)抑制β-catenin和上調(diào)Nanog的表達(dá)，來(lái)調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的分化及肝癌細(xì)胞干性特征的維持。
　　4.Notch3與肝癌細(xì)胞的化療敏感性及其生存相關(guān)。
　　5.Notch3與β-catenin相互作用為研究肝癌細(xì)胞自我更新機(jī)制