苯扎貝特對ox-LDL誘導人臍靜脈內(nèi)皮細胞凋亡的影響及LOX-1在其中的作用.pdf

1、目的：體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVECs)，用氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)干預后內(nèi)皮細胞受損，觀察其對內(nèi)皮細胞凋亡及血凝素樣氧化型低密度脂蛋白受體-1(LOX-1)表達的影響，研究過氧化物酶增生物激活受體α(PPARα)的配體苯扎貝特對ox-LDL作用后的內(nèi)皮細胞凋亡的影響并探討其機制。 方法：無菌培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細胞，采用形態(tài)學及抗Ⅷ因子抗體免疫熒光染色進行內(nèi)皮細胞鑒定。選擇生長良好的第4、5代細胞用于實驗。實驗分為

2、6組：①對照組：DMEM培養(yǎng)基；②oX-LDL組：培養(yǎng)基中加入終濃度為50mg/L的ox-LDL孵育24h；③低濃度苯扎貝特組：培養(yǎng)基中加入濃度為50umol/L的苯扎貝特預處理2h后，再加入ox-LDL(終末濃度50mg/L)共同孵育24h；④中濃度苯扎貝特組：苯扎貝特濃度為100umol/L，余同低濃度苯扎貝特組；⑤高濃度苯扎貝特組：苯扎貝特濃度為200μmol/L，余同低濃度苯扎貝特組。⑥多聚肌苷酸250μg/mL+中濃度苯扎貝特

3、組：用250μg/mL多聚肌苷酸預處理2小時，余同中濃度苯扎貝特組。應用RT-PCR和Wester-blot方法分別測定各組LOX-1基因和蛋白的表達；應用流式細胞儀從數(shù)量上檢測細胞凋亡狀況；用RT-PCR和Wlester-blot方法分別測①-⑤組凋亡基因Bcl-2、Bax的表達； 結果： (1)正常細胞生長良好，倒置顯微鏡下觀察可見其呈鋪路石狀鑲嵌排列，細胞為扁平多角形，邊界清楚，胞漿豐富。人第Ⅷ因子相關抗原的SP免

4、疫組化細胞漿內(nèi)染有棕黃色的染色顆粒為陽性反應，證實培養(yǎng)的細胞為內(nèi)皮細胞。 (2)正常對照組LOX-1(mRNA：0.17±0.10，蛋白：0.22±0.10)表達較低，用50mg/L，ox-LDL干預后LOX-1基因(0.90±0.15)和蛋白(0.91±0.06)表達較對照組明顯增加，有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；用不同濃度的苯扎貝特干預后LOX-1基因和蛋白表達較ox-LDL組明顯下降(mRNA分別為：0.56±0.08，0

5、.37±0.15，0.25±0.14蛋白分別為：0.57±0.26，0.38±0.18，0.27±0.04)有統(tǒng)計學意義，各組間比較亦有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。多聚肌苷酸250μg/mL+中濃度苯扎貝特組LOX-1表達(mRNA：0.27±0.13，蛋白：0.26±0.22)較中濃度苯扎貝特組進一步減少(P<0.05)。 (3)ox-LDL組與正常對照組比較內(nèi)皮細胞早期凋亡率及晚期凋亡率均明顯增加(P<0.05)，抗凋亡基因

6、Bcl-2表達下降(P<0.05)，凋亡基因BaX表達增加(P<0.05)，使Bcl-2和BaX的比值下降(P<0.05)，苯扎貝特可干預ox-LDL對內(nèi)皮細胞的作用，使HUVECs早期凋亡率及晚期凋亡率均明顯減少(P<0.05)，Bcl-2表達增加(P<0.05)，BaX表達降低(P<0.05)，Bcl-2/Bax上調(P＜0.05)，且其作用成濃度效應依賴關系。預先用LOX-1阻滯劑干預后細胞早期及晚期凋亡率較中濃度苯扎貝特組比較進

7、一步減少(P＜0.05)，但較高濃度組苯扎貝特組比較無明顯差別(P＞0.05)。 結論： (1)ox-LDL可引起內(nèi)皮細胞LOX-1表達增加，起到損傷內(nèi)皮細胞的作用。 (2)苯扎貝特可以通過下調LOX-1 mRNA和蛋白的表達改善ox-LDL對內(nèi)皮細胞的損。 (3)ox-LDL可引起內(nèi)皮細胞凋亡增加，上調抗凋亡基因Bcl-2表達，下降凋亡基因Bax表達，使Bcl-2和Bax的比值下降，苯扎貝特可改善ox-