糖基化終產(chǎn)物對結(jié)締組織生長因子表達影響及葛根素的干預(yù)作用.pdf

1、在體外培養(yǎng)的大鼠血管平滑肌細胞上,探討糖基化終產(chǎn)物(AGEs)對結(jié)締組織生長因子(CTGF)、基質(zhì)金屬蛋白酶-2(MMP-2)基因表達、蛋白質(zhì)分泌及酶活性的影響,以期將AGEs、生長因子、動脈粥樣硬化進一步緊密聯(lián)系起來,揭示AGEs致動脈粥樣硬化機制.在糖尿病動物模型的腎組織中觀察CTGF基因表達和蛋白質(zhì)免疫組織化學(xué)染色,并探討葛根素(Pue)、氨基胍(AG)在糖尿病動物模型中的干預(yù)作用,為進一步在臨床研究打下基礎(chǔ).采用組織塊貼壁法培養(yǎng)

2、主動脈平滑肌細胞.RT-PCR、Western blot、明膠酶圖法觀察AGEs對血管平滑肌細胞(VSMCs)表達CTGF、MMP-2的影響.鏈脲佐菌素腹腔注射誘導(dǎo),建立糖尿病大鼠模型.用葛根素腹腔注射、氨基胍喂食進行干預(yù).RT-PCR、免疫組織化學(xué)法檢測腎組織中CTGF的表達.結(jié)果顯示:不同糖濃度(20、50、80mmol/L)修飾的AGE-BSA、不同濃度的AGE-BSA(100、200、400mg/L)均可使VSMCs表達CTGF

3、增多,且隨著濃度升高而增加.AGEs作用4小時,CTGFmRNA表達即已升高,至72小時仍維持于較高水平.MMP-2mRNA表達水平及降解明膠活性隨著AGE-BSA濃度升高而增加,其表達高峰出現(xiàn)在AGEs干預(yù)后24小時.糖尿病大鼠腎皮質(zhì)CTGF mRNA表達水平明顯高于葛根素組和氨基胍組(p<0.01),后兩組又較正常對照組CTGF水平高(p<0.01).免疫組織化學(xué)顯示:正常腎小球幾無CTGF染色,葛根素和氨基胍治療組有染色,此兩組間