志賀菌對氟喹諾酮類藥物敏感性降低的相關(guān)耐藥基因研究.pdf

1、目的：
　　 研究本地區(qū)志賀菌對氟喹諾酮類抗菌藥物敏感性降低的相關(guān)耐藥基因以及志賀菌的耐藥特征、分子流行病學(xué)研究。
　　 材料與方法：
　　 收集杭州市第一人民醫(yī)院2008年5月至2010年10月從門診腹瀉患者分離的153株志賀菌，經(jīng)法國生物梅里埃VITEKAMS鑒定儀鑒定和志賀菌血清學(xué)鑒定確認(rèn)。采用瓊脂稀釋法對153株志賀菌進(jìn)行藥物敏感性檢測，采用PCR法檢測DNA旋轉(zhuǎn)酶A亞單位(gyrA)、拓?fù)洚悩?gòu)酶ⅣC亞單

2、位(parC)基因的喹諾酮類藥物耐藥決定區(qū)(QRDR)，并對PCR結(jié)果進(jìn)行測序分析，同時用PCR法對質(zhì)粒介導(dǎo)喹諾酮類耐藥(PMQR)基因qnr和aac(6')-Ib-cr進(jìn)行篩選。利用脈沖場凝膠電泳技術(shù)對菌株間的同源性進(jìn)行分析，通過接合實(shí)驗(yàn)證明耐藥基因位于質(zhì)粒上。
　　 結(jié)果：
　　 131株宋內(nèi)志賀菌對萘啶酸的耐藥率達(dá)100％，而對諾氟沙星、環(huán)丙沙星、左旋氧氟沙星全部敏感，對四環(huán)素、復(fù)方新諾明和氨芐西林的耐藥率分別為9

3、3.9％、92.8％和93.2％.94％的萘啶酸耐藥宋內(nèi)志賀菌株對氟喹諾酮類藥物敏感性出現(xiàn)下降。萘啶酸耐藥宋內(nèi)志賀菌菌株gyrA均發(fā)生單點(diǎn)突變，為83位絲氨酸→亮氨酸(Ser→Leu)突變，但parC未發(fā)生突變；未檢出質(zhì)粒介導(dǎo)PMQR基因qnr和aac(6')-Ib-cr基因。脈沖場凝膠電泳將131株宋內(nèi)志賀菌分為4個主要的克隆型。22株福氏志賀菌對萘啶酸的耐藥率達(dá)99％，除一株福氏志賀菌對萘啶酸、諾氟沙星、環(huán)丙沙星、左旋氧氟沙星全部敏

4、感外，其余21株福氏志賀菌對氟喹諾酮類藥物敏感性全部出現(xiàn)下降，其中6株福氏志賀菌對環(huán)丙沙星耐藥。萘啶酸耐藥福氏志賀菌同時發(fā)生gyrA的83位絲氨酸→亮氨酸(Ser→Leu)和parC的80位絲氨酸→異亮氨酸(Ser→ILe)突變時，才會造成萘啶酸耐藥福氏志賀菌對氟喹諾酮類藥物敏感性降低；在發(fā)生上述突變的基礎(chǔ)上，gyrA的87位天冬氨酸(Asp)被天冬酰胺(Asn)、甘氨酸(gly)、酪氨酸(Tyr)替代或qnr和aac(6')-Ib-c

5、r基因出現(xiàn)時，萘啶酸耐藥福氏志賀菌才會對氟喹諾酮類藥物產(chǎn)生耐藥。各有一株福氏志賀菌分別攜帶qnr和aac(6')-Ib-cr基因，PMQR基因均位于耐藥性質(zhì)粒上。脈沖場凝膠電泳將22株福氏志賀菌分為2個主要的克隆型。
　　 結(jié)論：
　　 萘啶酸耐藥宋內(nèi)志賀菌對氟喹諾酮類藥物敏感性降低非常普遍，其產(chǎn)生的主要機(jī)制為gyrA發(fā)生83位Ser→Leu替換。而萘啶酸耐藥福氏志賀菌已出現(xiàn)對氟喹諾酮類藥物耐藥，其產(chǎn)生的主要機(jī)制為gyr