RAPD技術(shù)研究6種擬釘螺的遺傳變異.pdf

1、自從證實(shí)擬釘螺可作為湄公血吸蟲(chóng)病、中華血吸蟲(chóng)病和貍殖吸蟲(chóng)病的傳播媒介以來(lái)，擬釘螺在醫(yī)學(xué)上的重要性被人們所重視，且近年來(lái)我國(guó)東南沿海及內(nèi)地的部分省市并殖吸蟲(chóng)病有此起彼伏、散在發(fā)生的趨勢(shì)，作為貍殖吸蟲(chóng)的第一中間宿主，擬釘螺的分類研究既有生物學(xué)上的理論價(jià)值，又有醫(yī)學(xué)上的實(shí)用價(jià)值。至今，有報(bào)道在亞洲發(fā)現(xiàn)屬于擬釘螺亞科的種類已逾100種，以我國(guó)為最多、分布最廣的國(guó)家，我國(guó)以往對(duì)擬釘螺的研究多限于傳統(tǒng)方法，在擬釘螺的分類研究中存在如種名錯(cuò)定、同種異

2、名等諸多問(wèn)題。近年來(lái)分子生物學(xué)的發(fā)展為物種鑒定開(kāi)辟了一條新路，本研究選用了RAPD技術(shù)對(duì)我國(guó)湖北、福建和廣西3省5地的6種擬釘螺進(jìn)行基因水平的研究，以了解其基因組DNA的多態(tài)性差異，并構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)。此外，形態(tài)學(xué)及地理生態(tài)環(huán)境比較一直是對(duì)螺種進(jìn)行鑒定的基本方法，也是進(jìn)行其它研究的基礎(chǔ)，所以本研究還將RAPD分類結(jié)果與6種擬釘螺的外部形態(tài)和生態(tài)環(huán)境進(jìn)行了綜合分析和初步探討。 方法 收集我國(guó)廣西省武鳴縣、福建省福州市新店以及

3、湖北省五峰縣沈家堡、十堰市許家溝、鐘祥市客店3省5地的6種擬釘螺。其中福建新店，五峰沈家堡，鐘祥客店的擬釘螺已有文獻(xiàn)記載，分別命名為新店擬釘螺(T.xindiangensis)，秉氏擬釘螺(T.pingi)，向氏擬釘螺(T.hsiangi)，洪山擬釘螺(T.hongshanensis)。廣西武鳴，湖北十堰的擬釘螺暫以地名命名為武鳴擬釘螺和十堰擬釘螺。1.肉眼和體視顯微鏡系統(tǒng)觀察擬釘螺的外部形態(tài)并記錄，了解其生態(tài)環(huán)境；2.常規(guī)高鹽法抽提上

4、述擬釘螺的基因組DNA，采用RAPD技術(shù)對(duì)其進(jìn)行PCR擴(kuò)增，以方格短溝蜷作為種外對(duì)照。根據(jù)RAPD擴(kuò)增的結(jié)果，計(jì)算各地?cái)M釘螺種間的遺傳距離和相似系數(shù)，根據(jù)各分子標(biāo)記的遷移率及其有或無(wú)，統(tǒng)計(jì)得所有位點(diǎn)的二元數(shù)據(jù)，采用SPSS11.0軟件的Between-groupslinkage法對(duì)所得二元數(shù)據(jù)進(jìn)行聚類分析，繪制系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)。 結(jié)果 ①6種擬釘螺形態(tài)特征觀察及棲息環(huán)境的比較結(jié)果： 秉氏擬釘螺和向氏擬釘螺均采自湖北五峰

5、縣沈家堡，兩者的生態(tài)環(huán)境完全相同，外部形態(tài)上相似處頗多。洪山擬釘螺與新店擬釘螺在外部形態(tài)和生態(tài)環(huán)境方面較為相似。而其它螺種間則相對(duì)差異較大。 ②DNA提取： DNA溶液A260/A280值經(jīng)測(cè)定在1.60～2.00之間，純度符合要求。 ③RAPD： 1)種外差異6條引物對(duì)擬釘螺與方格短溝蜷的DNA擴(kuò)增的條帶共計(jì)87條，對(duì)應(yīng)基因組中的87個(gè)位點(diǎn)，其中擬釘螺的條帶71條，方格短溝蜷14條；兩者間相同條帶為5條

6、，相似系數(shù)為0.339，遺傳距離大于0.66。 2)種間差異本實(shí)驗(yàn)擬釘螺種間遺傳距離在0.1301～0.3151間，平均值為0.2248，其中秉氏擬釘螺和向氏擬釘螺的擴(kuò)增帶型具有較大相似性，相似系數(shù)為0.8699，遺傳距離僅為0.1301；新店擬釘螺與洪山擬釘螺的擴(kuò)增帶型具有較大相似性，相似系數(shù)為0.8558，遺傳距離僅為0.1442，此兩種與十堰擬釘螺擴(kuò)增條帶又具有一定相似性；而武鳴擬釘螺與其它螺種間則差異較顯著，遺傳距離為0

7、.2234～0.3151。 3)系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)在SPSS構(gòu)建的系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)中6種擬釘螺被分為4類：①秉氏擬釘螺和向氏擬釘螺；②洪山擬釘螺和新店擬釘螺；③十堰擬釘螺；④武鳴擬釘螺。 結(jié)論 根據(jù)RAPD的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，3省5地的6種擬釘螺在基因水平分為4類： ①秉氏擬釘螺和向氏擬釘螺； ②洪山擬釘螺和新店擬釘螺； ③十堰擬釘螺； ④武鳴擬釘螺。 6種擬釘螺在基因水平上存在差異。結(jié)合外部形