巨噬細胞活化的間質干細胞在胃癌發(fā)展中的作用及機制.pdf

1、目的:探究炎癥環(huán)境下，巨噬細胞對間質干細胞(MSC)的促炎作用及干細胞特性影響，并探討巨噬細胞活化的MSC對胃上皮細胞和胃癌細胞的惡性轉化作用及其機制，為探尋腫瘤環(huán)境細胞在慢性炎癥轉化腫瘤中的作用及機制提供新的依據。
　　方法:應用液相芯片(Luminex)技術和qRT-PCR檢測炎癥環(huán)境下經巨噬細胞活化的MSC分泌和表達炎癥因子的差異，采用Westernblot及qRT-PCR比較活化前后MSC中干性基因的改變。平板克隆形成實驗

2、及transwell遷移實驗評價活化后的MSC分泌的上清對胃上皮細胞和胃癌細胞生長和遷移能力的作用，Western blot檢測PCNA、VEGF及EMT相關蛋白的表達，并采用qRT-PCR比較各組胃上皮細胞及胃癌細胞中VEGF、MMP9及TGF-β的表達差異。Western blot及qRT-PCR檢測不同MSC分泌上清對胃癌細胞干性基因表達的影響。Western blot檢測不同MSC上清作用后的胃上皮細胞和胃癌細胞中NF-κB、E

3、RK1/2和STAT3的活化情況。采用PDTC抑制NF-κB活化，平板克隆形成實驗和transwell遷移實驗評估對胃癌細胞增殖和遷移的抑制效果。裸鼠皮下致瘤模型研究活化前后MSC對胃癌細胞致瘤能力的影響，免疫組化檢測瘤組織中PCNA和VEGF，qRT-PCR檢測轉移相關基因及腫瘤干性基因的表達情況。
　　結果:Luminex和qRT-PCR結果顯示炎癥刺激下巨噬細胞活化后的MSC炎癥因子表達明顯上調，且干性基因Oct4及Sox2

4、表達也有增強。該活化后的MSC分泌上清對胃上皮細胞和胃癌細胞具有不同程度的促增殖、促遷移作用，并能引起轉移相關基因VEGF、MMP9及TGF-β表達的上調，且能增強胃癌細胞干性基因的表達。Western blot結果顯示，其對胃上皮細胞和胃癌細胞的促增殖、促遷移作用與NF-κB、ERK1/2和STAT3的活化有關，且對胃癌細胞的促進作用可被NF-κB抑制劑PDTC所抑制。裸鼠皮下致瘤實驗表明，經巨噬細胞活化后的MSC能增強胃癌細胞的致瘤