縫隙連接在一氧化氮緩解腦血管痙攣中作用的研究.pdf

1、目的： 蛛網(wǎng)膜下腔出血（SAH）后腦血管內外舒張因子一氧化氮（NO）減少是誘發(fā)腦血管痙攣（cvs）的最重要因素之一。同樣縫隙連接（GJ）在許多心腦血管疾病的發(fā)生和發(fā)展中扮演著重要角色。本實驗在前期研究的基礎上，擬研究縫隙連接在NO緩解腦血管痙攣中的作用及縫隙連接蛋白表達的變化，為更深入研究腦血管GJ通道參與蛛網(wǎng)膜下腔出血（SAH）后CVS的機制奠定基礎，為臨床防治cvs提供更好的理論依據(jù)。 方法： 1.體外游離腦

2、血管環(huán)張力實驗：各實驗組動物處死后斷頭取腦，分離基底動脈，將其剪成3-4mm的動脈環(huán)。用不同濃度的前列腺素F2a（PGF2a）、不同濃度的NO供體DETA-NO、不同濃度的GJ阻斷劑甘珀酸、可溶性鳥苷酸環(huán)化酶（sGC）抑制劑1 H-[1，2，4]惡二唑[4，3，-a]喹喔啉-1-酮（ODQ）等藥物孵育，應用生物信息轉換記錄儀記錄血管張力的變化。 2.體外腦血管條孵育：各實驗組動物被處死后立即斷頭取腦，顯微鏡下分離基底動脈，將其剪

3、成完整的動脈條；用不同濃度的PGF2a、不同濃度的DETA-NO、GJ阻斷劑甘珀酸、sGC抑制劑ODQ等藥物孵育動脈條；Western Blotting檢測兔基底動脈條縫隙連接蛋白43（Cx43）蛋白表達的變化。 3.兔體內CVS模型的建立及藥物處理：采用同種系兔。靜脈麻醉動物后，行小腦延髓池穿刺，注入自體非抗凝血以建立體內SAH模型。NO供體DETA-NO、sGC抑制劑ODQ均經(jīng)鞘內注入小腦延髓池。采用選擇性的腦血管造影技術測

4、量BA直徑變化：Western blotting檢測兔基底動脈Cx43蛋白表達的變化。 結果： 1.0.3-30μmol/L的PGF2a能明顯誘導游離腦血管環(huán)收縮，并呈濃度依賴性地增加血管環(huán)張力，10μmol/L的PGF2a即能明顯地誘導體外腦血管環(huán)收縮；用DETA-NO處理后能明顯緩解PGF2a誘導的體外腦血管環(huán)的張力，0.3-100μmol/L的DETA-NO呈濃度依賴性地緩解血管環(huán)的收縮；用ODQ干預后能有效地減弱

5、DETA-NO緩解PGF2a誘導的腦血管環(huán)的收縮；GJ阻斷劑甘珀酸處理和預處理后均能有效地緩解PGF2a誘導的體外血管環(huán)收縮，不同濃度的甘珀酸呈濃度依賴性地緩解PGF2a誘導的體外腦血管環(huán)的收縮。 2.0.3-30μmol/L的PGF2a能使體外基底動脈中Cx43蛋白的表達呈濃度依賴性地上調；DETA-NO處理后能有效地抑制PGF2a誘導的Cx43蛋白表達上調，DETA-NO在0.3-100μmol/L范圍內呈濃度依賴性地抑制P

6、GF2a誘導的Cx43蛋白表達上調，而300μmol/L的DETA-NO卻不能有效地下調Cx43蛋白的表達；用ODQ干預后能有效地抑制DETA-NO下調Cx43蛋白的表達；GJ阻斷劑可明顯抑制PGF2a誘導Cx43蛋白表達的增加。 3.腦血管造影顯示DETA-NO能明顯緩解CVS，用sGC抑制劑ODQ干預后可抑制DETA-NO緩解CVS的作用。SAH后Day7基底動脈中Cx43蛋白表達較正常組明顯上調；SAH后Day7注入DET

7、A-NO后基底動脈中Cx43蛋白表達較SAH組蛋白表達明顯下調：sGC抑制劑ODQ干預后可有效地抑制DETA-NO下調Cx43蛋白的表達。 結論： 1.縫隙連接參與了PGF2a誘導的腦血管收縮過程。PGF2a呈濃度依賴性地誘導離體基底動脈收縮，并呈濃度依賴性地使離體腦血管中Cx43蛋白表達上調；GJ抑制劑甘珀酸能有效地抑制PGF2a誘導的腦血管收縮，并可使PGF2a收縮腦血管中Cx43蛋白的表達下調。 2.縫隙連