外源性血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子結(jié)合高壓氧治療對(duì)大鼠隨意皮瓣存活的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的： 修復(fù)醫(yī)學(xué)是近年來(lái)研究的熱點(diǎn)，隨著社會(huì)的進(jìn)步和醫(yī)學(xué)的發(fā)展，其重要性越來(lái)越受到人們的關(guān)注，一般來(lái)講，修復(fù)過(guò)程是臨床各種創(chuàng)傷和疾病治療過(guò)程中的共同轉(zhuǎn)歸。理想的修復(fù)結(jié)局應(yīng)當(dāng)是受創(chuàng)傷組織解剖結(jié)構(gòu)和生理功能達(dá)到完全的康復(fù)。但在實(shí)際的修復(fù)過(guò)程中，許多組織內(nèi)外因素將從細(xì)胞、分子以及基因水平影響或干擾修復(fù)過(guò)程，從而使修復(fù)過(guò)程難以按照人的意愿發(fā)展而出現(xiàn)修復(fù)失控。在整形修復(fù)外科領(lǐng)域里，隨意型皮瓣是最常運(yùn)用的修復(fù)方式之一。但由于皮瓣中沒(méi)有知名的

2、血管，血供僅靠皮下的毛細(xì)血管網(wǎng)，故在皮瓣設(shè)計(jì)上，常須遵循一個(gè)原則，即皮瓣的長(zhǎng)、寬度之比的限度為長(zhǎng)：寬=1．5：1，在某些局部血運(yùn)豐富的區(qū)域，可達(dá)3：1。超出這個(gè)范圍，皮瓣的遠(yuǎn)端極易發(fā)生缺血壞死。隨意皮瓣移植有著10%-20%的失敗率，當(dāng)必須采用這種超長(zhǎng)皮瓣時(shí)，往往須做一次“延遲”手術(shù)，以改建皮瓣中的血供系統(tǒng)，保證血運(yùn)。如何能實(shí)現(xiàn)這種超長(zhǎng)皮瓣的一次轉(zhuǎn)移成功，是一個(gè)值得研究的課題。本實(shí)驗(yàn)研究旨在探討超長(zhǎng)隨意皮瓣局部注射血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VE

3、GF）合并應(yīng)用高壓氧（Hyperbaric Oxygen，HBO）是否可改善皮瓣微循環(huán)、增加皮瓣的血運(yùn)從而提高皮瓣成活率。 材料與方法： 1、分組：成年大鼠12只按照隨機(jī)分配的原則，分為2組，A組（實(shí)驗(yàn)組）：6只；B組（空白對(duì)照組）：6只。 2、皮瓣制備：于大鼠腹部制備隨意皮瓣，將其長(zhǎng)寬比例定為3：1（3X1cm）。用5%的戊巴比妥鈉（10mg/kg）靜脈注射麻醉后，脫毛、備皮、消毒后，從預(yù)制皮瓣的遠(yuǎn)端開(kāi)始，于肉

4、膜層與真皮下血管網(wǎng)層之間分離皮瓣，制備成隨意型皮瓣。 3、VEGF試劑注射。 4、高壓氧處理。 5、術(shù)后于第4天、第10天、第12天分別對(duì)成形皮瓣的遠(yuǎn)、中、近段做PU值測(cè)定。術(shù)后第12天處死大鼠，切取皮瓣標(biāo)本，并立即用4%PFA（多聚甲醛）溶液固定，制作蠟塊，連續(xù)切片，做常規(guī)染色觀察組織形態(tài)變化，免疫組化法（SP法）分析增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）和微血管密度（MVD）的檢測(cè)。用SPSS13．0建立數(shù)據(jù)庫(kù)并對(duì)結(jié)果進(jìn)

5、行方差分析。 結(jié)果： ①激光多普勒皮膚血流量（PU值）測(cè)定皮瓣形成前兩組值差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在皮瓣形成后的不同時(shí)期兩組皮瓣均表現(xiàn)為遠(yuǎn)段血流灌注比中段和近段差，其中近段血供最佳，兩組皮瓣形成后同一時(shí)期不同部位的值在近段的差異性無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而中、遠(yuǎn)段值有顯著差異。 ②HE染色：A組存活皮瓣的皮下組織有一定程度的水腫，表皮增生活躍，表皮下有大面積的肉芽組織增生，細(xì)胞增生明顯，大量新生毛細(xì)血管形成。B組存活皮瓣皮下組織

6、水腫明顯，有散在的皮下出血，新生血管和肉芽組織分布范圍明顯小于A組。遠(yuǎn)端皮瓣完全壞死，細(xì)胞形態(tài)喪失。 ③增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）檢測(cè)：A組存活皮瓣中細(xì)胞增生活躍（PI=63%），大量棕黃染色的增殖細(xì)胞核，基底層細(xì)胞增生尤為明顯，增生的肉芽組織中有大量的新生毛細(xì)血管，B組表達(dá)較弱（PI=20%），陽(yáng)性細(xì)胞散在分布，新生血管少。兩組皮瓣有顯著差異性。 ④皮瓣微血管密度（MVD）檢測(cè)：A組有大量的被棕黃染色的血管內(nèi)皮細(xì)胞，端

7、面血管分布密集MVD=45個(gè)/c㎡，B組血管分布較少，棕黃染色的血管內(nèi)皮細(xì)胞稀疏MVD=20個(gè)/c㎡。兩組MVD有顯著差異性（P<0．001）。 結(jié)論： 1、術(shù)后局部注射血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）合并應(yīng)用高壓氧（Hyperbaric Oxygen，HBO）治療可明顯降低大鼠腹部隨意皮瓣壞死率，促進(jìn)皮瓣成活。2、HBO能提高皮瓣組織中的血管密度。3、局部注射血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）合并應(yīng)用高壓氧促進(jìn)隨意皮瓣微小血管形