哮喘CC16表達及糖皮質(zhì)激素和白三烯受體拮抗劑影響的實驗研究.pdf

1、目的:觀察哮喘小鼠氣道Clara細胞主要分泌蛋白CC16表達以及布地奈德和孟魯司特干預后對其的影響，探討CC16在哮喘發(fā)病中的作用。 方法:取96只BALB/C小鼠，隨機分為4組：哮喘模型組(A組)，布地奈德干預組(B組)，孟魯司特干預組(C組)，正常對照組(D組)，每組24只。除對照組外，其余3組小鼠分別在第0、7d腹腔注射卵清蛋白(OVA)混懸液0.5 mL(含OVA100μ g，氫氧化鋁凝膠400μg)致敏，第14d起以1

2、0g/L OVA溶液50mL超聲霧化激發(fā)，每日30min，連續(xù)7d。孟魯司特組在霧化吸入后1小時按6 mg/kg口服孟魯司特4周；布地奈德組在霧化吸入后1小時吸入布地奈德混懸液30 min(布地奈德原液2ml+NS3ml)，連續(xù)4周；正常對照組：小鼠第0和第7d腹腔注射生理鹽水0.5 mL，第14d起以生理鹽水50mL溶液超聲霧化，每天30 min，連續(xù)7d。每周各組各處死6只小鼠，連續(xù)4周。4組小鼠眼球摘除采血，取血清，采用ELISA

3、(酶聯(lián)免疫)法測分泌類蛋白(CC16)。左肺組織用10％甲醛固定后常規(guī)石蠟包埋切片，部分行蘇木精-伊紅(HE)染色觀察炎癥細胞的浸潤；部分行免疫組化觀察肺組織CC16表達；右肺組織RT-PCR檢測CC16mRNA表達。 結(jié)果: 1、各組小鼠外周血CC16蛋白表達 第1、2、3周A、B、C三組CC16蛋白OD值均顯著低于D組(P<0.05)，第4周CC16蛋白OD值四組比較無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；B組、C組與

4、A組比較僅第1周有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；A、B、C三組隨時間延長CC16蛋白OD值均顯著升高(P<0.05)，D組隨時間延長CC16蛋白OD值無顯著變化(P>0.05)。 2、各組小鼠肺組織CC16蛋白免疫組化 第1、2、3、4周A、B、C三組CC16蛋白免疫組化灰度值均顯著高于D組(P<0.05)；B組各周灰度值均顯著低于A組(P<0.05)；C組與A組比較僅第4周有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，而C組與B組比較僅

5、第4周無統(tǒng)計學意義( P>0.05)；A、B、C三組隨時間延長CC16蛋白免疫組化灰度值均顯著降低(P<0.05)，D組隨時間延長CC16蛋白免疫組化灰度值無顯著變化(P>0.05)。 3、各組小鼠肺組織CC16mRNA表達 第1、2、3、4周A、B、C三組CC16mRNA表達量均顯著低于D組(P<0.05)；B組各周CC16mRNA表達量均顯著高于A組(P<0.05)；C組CC16mRNA表達量僅第1、第4周顯著高于A

6、組(P<0.05)，而C組與B組比較僅第1周無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；A、B、C三組隨時間延長CC16mRNA表達量均顯著增加(P<0.05)，D組隨時間延長CC16mRNA表達量無顯著變化(P>0.05)。 4、小鼠外周血CC16蛋白與肺組織CC16mRNA表達總體相關(guān)性 外周血CC16蛋白與肺組織CC16mRNA表達總體呈正相關(guān)(r=0.777，p<0.0001)。 結(jié)論: 1、哮喘小鼠肺組織內(nèi)C

7、C16mRNA表達水平和外周血CC16蛋白濃度均降低，且隨肺部炎癥細胞增多而逐漸降低，因此CC16可作為反映哮喘氣道炎癥的指標。 2、吸入性糖皮質(zhì)激素(布地奈德)干預可以顯著增加哮喘小鼠CC16蛋白的表達，且隨治療時間延長CC16表達增加更加明顯，抗哮喘氣道炎癥的作用更強。 3、白三烯受體拮抗劑(孟魯司特)干預4周以上可以增加CC16蛋白表達水平；起效較布地奈德慢，到4周后效果與布地奈德相似。 4、外周血CC16