肉雞組織的熱應(yīng)激損傷和熱休克蛋白60的表達(dá)變化.pdf

1、本研究以雞為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物建立了具有實(shí)踐指導(dǎo)意義的熱應(yīng)激模型.在此基礎(chǔ)上采用組織病理學(xué)、免疫組織化學(xué)、ELISA、熒光定量PCR等方法，研究不同熱應(yīng)激時(shí)間對(duì)肉雞不同組織臟器的應(yīng)激性損傷、Hsp60及其mRNA的表達(dá)情況。 將120只肉雞隨機(jī)分成1組(對(duì)照組)、2組(熱應(yīng)激1 h組)、3組(熱應(yīng)激2h組)、4組(熱應(yīng)激3h組)、5組(熱應(yīng)激5h組)和6組(熱應(yīng)激10 h組)，每組20只.除了對(duì)照組不進(jìn)行熱應(yīng)激處理(溫度控制在25±1℃)

2、之外，將其它各熱應(yīng)激組的環(huán)境溫度在20 min內(nèi)從室溫突然升至37±1℃.按試驗(yàn)設(shè)定的時(shí)間剖殺對(duì)照組肉雞和熱應(yīng)激處理各組肉雞，每組受試雞按要求采集外周血液，經(jīng)離心制備血清，-20℃保存用于CK和GPT活性檢測(cè)；分別解剖受試雞取心臟、肝臟、腎臟和肺臟，一部分固定在4％多聚甲醛中，用于HE染色和免疫組化檢測(cè)，另一部分置于-70℃保存，用于Hsp60及其mRNA的檢測(cè)。 試驗(yàn)結(jié)果顯示，持續(xù)熱應(yīng)激處理后的肉雞血液肌酸激酶(CK)和谷丙轉(zhuǎn)

3、氨酶(GPT)均顯著升高，CK在2、3、5和10h與對(duì)照組差異極顯著(P<0.01)，GPT在3h與對(duì)照組差異顯著(P<0.05)，在5 h和10 h極顯著升高(P<0.01)，提示熱應(yīng)激導(dǎo)致機(jī)體損傷隨著應(yīng)激時(shí)間延長(zhǎng)而加劇。 HE染色結(jié)果顯示，持續(xù)熱應(yīng)激處理3h后的肉雞心臟和腎臟組織均呈現(xiàn)出以顆粒變性和水泡變性為主要特征的不同程度的病理性損傷，并且這種病理損傷隨著熱應(yīng)激時(shí)間的延長(zhǎng)而加重.對(duì)照組雞無以上病理變化。 IH

4、C實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，不管是實(shí)驗(yàn)組還是對(duì)照組，Hsp60都有表達(dá)，在心臟主要定位于心肌纖維上的胞漿中，而在肝臟主要定位于肝細(xì)胞胞漿上，腎臟中主要定位于腎小管上皮細(xì)胞胞漿上，但是，熱應(yīng)激組雞Hsp60陽性信號(hào)分布不均勻，主要集中于細(xì)胞結(jié)構(gòu)相對(duì)完整的部位，這個(gè)結(jié)果提示Hsp60的表達(dá)與熱應(yīng)激損傷有關(guān)。 ELISA結(jié)果顯示，Hsp60在三個(gè)組織的表達(dá)量不一樣。心臟中Hsp60在熱應(yīng)激2h就極顯著升高，并且，在3h、5h和10h一直維持高表

5、達(dá)，與對(duì)照組比較差異顯著，肝臟中Hsp60在熱應(yīng)激后呈下降趨勢(shì)，在熱應(yīng)激3h時(shí)降帶最低點(diǎn)，與對(duì)照差異極顯著，在5h是有個(gè)短暫的恢復(fù)區(qū)，在10 h時(shí)又顯著下降，腎臟Hsp60變化趨勢(shì)與肝臟相似，但是差異不顯著.熱應(yīng)激后Hsp60在三個(gè)臟器表達(dá)各不相同，提示Hsp60發(fā)揮保護(hù)作用具有組織依賴性， 熒光定量PCR結(jié)果顯示，心臟中hsp60 mRNA在2h極顯著升高，呈現(xiàn)一個(gè)峰值，隨著熱應(yīng)激時(shí)間的延長(zhǎng)，逐漸恢復(fù)正常.肝臟中hsp60 m

6、RNA在熱應(yīng)激1h就迅速升碩士學(xué)位論文：肉雞的熱應(yīng)激損傷與熱休克蛋白60的表達(dá)變化高，在2h短暫恢復(fù)至正常，在3h、5h和10h又逐漸升高，與對(duì)照組差異顯著.腎臟hsp60 mRNA變化趨勢(shì)與心臟相似，在2h出現(xiàn)一個(gè)峰值極顯著升高，然后逐漸恢復(fù)正常.hsp60 mRNA熱應(yīng)激后主要表現(xiàn)為升高，且這種表達(dá)在不同熱時(shí)間表現(xiàn)不一樣，提示熱應(yīng)激可以誘導(dǎo)hsp60 mRNA的高表達(dá)，并且hsp60 mRNA的表達(dá)具有時(shí)間特異性。 熱應(yīng)激不