竹黃有效成份的提取及其對類風濕性關節(jié)炎TNF-α通路影響的探討.pdf

1、目的:應用TNF-α誘導的小鼠成纖維細胞L929為模型,探索中藥竹黃治療類風濕性關節(jié)炎的機制。重點研究竹黃提取物對模型細胞生長和凋亡的影響,并從分子水平闡述竹黃提取物對TNF-α誘導的L929細胞NF-κB蛋白的變化。通過上述研究,深入分析竹黃提取物對TNF-α信號轉導通路的影響,分析竹黃治療類風濕性關節(jié)炎的可能作用途徑。所獲結果可為臨床上竹黃治療類風濕關節(jié)炎提供理論依據,應用細胞模型可以進行相關藥物有效部位或成分的進一步純化與分析,有

2、利于合理開發(fā)和利用竹黃這一中藥資源。
　　 方法:(1)采用索氏提取法提取竹黃有效成分；(2)SRB法檢測經竹黃提取物處理的TNF-α誘導的L929細胞生長抑制作用的變化；形態(tài)學觀察不同濃度竹黃提取物處理對TNF-α誘導的L929細胞的形態(tài)學變化；Hoechst染色和流式細胞術檢測不同濃度的竹黃提取物對TNF-α誘導的L929細胞的凋亡率的變化；Western blotting檢測不同濃度竹黃對TNF-α誘導的L929細胞中NF

3、-κB P65蛋白的表達情況。
　　 結果:(1)得到深紅色藥膏,顏色反應顯示含有苝醌類化合物；(2)竹黃提取物能改變TNF-α誘導的L929細胞的形態(tài)學變化；SRB試驗結果顯示,竹黃提取物能夠降低TNF-α對L929細胞的生長抑制作用,并成濃度依賴性；Hocehst和流式細胞結果顯示竹黃提取物能降低TNF-α誘導的L929細胞的凋亡率,并成濃度依賴性；(3)竹黃提取物能降低TNF-α誘導的L929細胞的NF-κB p65蛋白的