端粒酶活性的檢測(cè)方法及應(yīng)用研究.pdf

1、華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文端粒酶活性的檢測(cè)方法及應(yīng)用研究姓名：何敏申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：勞動(dòng)衛(wèi)生與環(huán)境衛(wèi)生學(xué)指導(dǎo)教師：周宜開(kāi)徐順清2001.4.1半中科或丈學(xué)周，嚌壓學(xué)臃搏窖學(xué)芷般斷標(biāo)記物的特異性為91％，敏感性為85％。而正常體細(xì)胞(除外生殖細(xì)胞及造血干細(xì)胞)檢測(cè)不到端粒酶活性或僅檢測(cè)到低水平的端粒酶活性。探測(cè)細(xì)胞內(nèi)端粒酶活性需要有靈敏準(zhǔn)確的測(cè)定方法。近年來(lái)建立的TRAP(telomericrepeatamplificati

2、onprotoc01)法以PCR技術(shù)放大端粒酶反應(yīng)產(chǎn)物的量，大大提高提高檢測(cè)的靈敏度。目前應(yīng)用最廣的端粒酶活性分析方法就是以TRAP法為基礎(chǔ)的各種方式。但總的來(lái)說(shuō)還缺乏靈敏度和特異性高，定量準(zhǔn)確的檢測(cè)端粒酶活性的方法。建立端粒酶的準(zhǔn)確定量系統(tǒng)和量化各種正常與腫瘤組織端粒酶表達(dá)，是在臨床應(yīng)用端粒酶作為腫瘤診斷和判斷預(yù)后的關(guān)鍵。目前有許多生物技術(shù)及制藥公司正在以端粒酶為靶點(diǎn)，發(fā)掘端粒酶抑制劑作為治療腫瘤的有效藥物。端粒酶是目前已知的最為廣譜

3、的腫瘤分子標(biāo)記、物，并且有可能成為腫瘤治療的新靶點(diǎn)。對(duì)端粒酶的研究還處在方興未艾之際廠7第二章端粒酶活性定性檢測(cè)方法的研究目的：探討TRAP銀染法、TRAPSYBRGreen染色法定性檢測(cè)端粒酶活性的方法，以及利用適配分子(Aptamer)提高TRAP法檢測(cè)靈敏度的可能。(方法：采用TRAP銀染法定性檢測(cè)293細(xì)胞株、白血病細(xì)胞株及不同陰性對(duì)照組標(biāo)本的端粒酶活性；采用TRAPSYBRGreen染色法檢測(cè)A549肺腺癌細(xì)胞株、293細(xì)胞株