銀杏葉提取物對(duì)大鼠肝移植缺血-再灌注損傷凋亡及其調(diào)控基因的影響.pdf

1、第一章大鼠原位肝移植模型(oLT)的建立 目的：探討大鼠原位肝臟移植(OLT)模型的建立方法，為臨床肝臟移植的相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究提供理想的動(dòng)物模型。 方法：采用Kamada’s二袖套法，并在此基礎(chǔ)上加以改良，共施行了150例大鼠原位肝臟移植手術(shù)。 結(jié)果：在90例定型手術(shù)中，供肝熱缺血時(shí)間0～1min，冷缺血時(shí)間90min，無(wú)肝期平均為18～22min(19.7±1.6min)。手術(shù)成功率91．1％(82／90)。

2、 結(jié)論：該動(dòng)物模型穩(wěn)定可靠，可為肝臟移植的基礎(chǔ)及臨床相關(guān)研究提供較為理想的研究手段和方法。 第二章銀杏葉提取物對(duì)大鼠肝移植缺血/再灌注損傷凋亡及其調(diào)控基因的影響 目的：探討銀杏葉提取物(EGb)對(duì)大鼠肝移植缺血／再灌注損傷凋亡及其調(diào)控基因表達(dá)的影響。 方法：雄性SD大鼠分別作供體、受體。采用Kamada’s二袖套法建立大鼠原位肝臟移植模型，根據(jù)供肝切取前1 h是否靜脈注射銀杏葉提取物(40mg／kg)將大鼠

3、隨機(jī)分為銀杏葉提取物預(yù)處理組(EGb)；生理鹽水對(duì)照組(Saline group NS)；假手術(shù)組(Sham operation SO)。分別于供肝再灌注或假手術(shù)后2 h，6 h，24 h各時(shí)間點(diǎn)處死動(dòng)物，檢測(cè)血清ALT和AST；HE染色切片作病理組織學(xué)檢查，TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞凋亡；免疫組織化學(xué)檢測(cè)TNF-α及Bcl-2蛋白的表達(dá)；RT-PCR檢測(cè)新鮮肝組織中的TNF-amRNA及Bcl-2mRNA的表達(dá)。 結(jié)果：EGb組及N

4、S組血清ALT和AST水平，在供肝再灌注后2 h，6 h及24 h各時(shí)間點(diǎn)均明顯均高于SO組。供肝再灌注后2 h，6 h及24 h各時(shí)間點(diǎn)，EGb組血清ALT和AST水平均低于NS組。：EGb組及NS組細(xì)胞凋亡指數(shù)，在供肝再灌注后2 h，6 h及24 h各時(shí)間點(diǎn)均明顯高于SO組。供肝再灌注后2 h，6h及24 h各時(shí)間點(diǎn)，EGb組細(xì)胞凋亡指數(shù)均低于NS組。EGb組在供肝再灌注后2 h，6 h各時(shí)間點(diǎn)TNF-amRNA和TNF-a蛋白的表

5、達(dá)明顯低于NS組。EGb組在供肝再灌注后2 h，6 h及24 h各時(shí)間點(diǎn)Bcl一2mRNA和Bcl-2蛋白的表達(dá)明顯高于NS組。 結(jié)論：(1)細(xì)胞凋亡在肝移植I／R．損傷中占有重要地位，細(xì)胞凋亡多發(fā)生在肝移植I／R．的早期，并可能參與肝移植I／R損傷過(guò)程，與再灌注損傷的程度有一定的關(guān)系。(2)銀杏葉提取物抗凋亡機(jī)制可能與影響細(xì)胞凋亡調(diào)控基因的表達(dá)有關(guān)，即促進(jìn)抗凋亡基因Bcl-2的表達(dá)和抑制促進(jìn)凋亡基因TNF-α的表達(dá)。(3)銀杏

6、葉提取物預(yù)處理供肝可以有效減輕肝移植I／R損傷，其機(jī)制可能與EGb的抗氧自由基作用和減輕鈣超載有關(guān)。(4)銀杏葉提取物預(yù)處理供肝可以有效減輕肝移植I／R損傷和移植肝細(xì)胞凋亡的發(fā)生。 第三章 銀杏葉提取物對(duì)大鼠肝移植缺血／再灌注損傷中Caspase-3、Fas表達(dá)的影響 目的：探討銀杏葉提取物(EGb)預(yù)處理對(duì)大鼠肝移植的保護(hù)作用及對(duì)Fas和Caspase-3表達(dá)的影響。 方法：雄性SD大鼠分別作

7、供體、受體。采用Kamada’s二袖套法建立大鼠原位肝臟移植模型，根據(jù)供肝切取前1h是否靜脈注射銀杏葉提取物(40mg／kg)將大鼠隨機(jī)分為銀杏葉提取物預(yù)處理組(EGb)；生理鹽水對(duì)照組(Saline group NS)；假手術(shù)組(Sham operation SO)。分別于供肝再灌注后或假手術(shù)后2h、6h、24h各時(shí)間點(diǎn)處死動(dòng)物，檢測(cè)血清ALT、AST；HE染色切片作病理組織學(xué)檢查；免疫組織化學(xué)檢測(cè)Fas，Caspase-3蛋白的表達(dá)

8、；RT-PCR檢測(cè)新鮮肝組織中FasmRNA和Caspase-3mRNA的表達(dá)。 結(jié)果：EGb組及NS組血清ALT和AST水平，在供肝再灌注后2h，6h及24h各時(shí)間點(diǎn)均明顯均高于SO組。供肝再灌注后2 h，6 h及24 h各時(shí)間點(diǎn)，EGb組血清ALT和AST水平均低于NS組。供肝再灌注后2 h，6 h及24 h各時(shí)間點(diǎn)銀杏葉提取物預(yù)處理組Caspase-3蛋白、Caspase-3mRNA及Fas蛋白、FasmRNA的表達(dá)均明顯