脊髓全橫斷損傷后差異表達(dá)蛋白的蛋白質(zhì)組學(xué)分析.pdf

1、目的：脊髓損傷是一種嚴(yán)重的神經(jīng)系統(tǒng)創(chuàng)傷，可因各類事故、運(yùn)動(dòng)、暴力等造成，損傷后會(huì)造成損傷平面以下的感覺、運(yùn)動(dòng)障礙，反射異常以及大小便失禁等相應(yīng)的病理改變。如何促進(jìn)SCI后的神經(jīng)再生和功能恢復(fù)，治愈截癱，一直是醫(yī)學(xué)界一大難題。其原因主要是脊髓損傷后修復(fù)的分子機(jī)理還不清楚，不能有針對(duì)性地對(duì)脊髓損傷修復(fù)過程中起關(guān)鍵作用的因子進(jìn)行有效的干預(yù)。隨著對(duì)SCI損傷機(jī)制的深入探索，許多研究表明CNS有內(nèi)在的自我修復(fù)功能。一些在SCI后促進(jìn)或抑制軸突再生

2、的蛋白質(zhì)逐漸被發(fā)現(xiàn)，如神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子-3(NT-3)、腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)、勿動(dòng)蛋白(Nogo)。然而，在損傷區(qū)域的微環(huán)境中許多重要的調(diào)控因子仍有待于發(fā)現(xiàn)。所以本實(shí)驗(yàn)的目的就是借助蛋白質(zhì)組學(xué)相關(guān)技術(shù)找出大鼠脊髓損傷前后差異表達(dá)的蛋白質(zhì)，為進(jìn)一步了解SCI的損傷及修復(fù)機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：利用SD大鼠建立脊髓全橫斷模型。造模成功后取出正常組和損傷組大鼠相應(yīng)部位的脊髓組織，用兩步法分別提取親水性和

3、疏水性蛋白，經(jīng)過蛋白定量后，以相同的上樣量進(jìn)行雙向電泳。蛋白凝膠經(jīng)PDQuest 7.1.1軟件分析后，找出差異表達(dá)的蛋白質(zhì)點(diǎn)，然后用胰酶將這些蛋白質(zhì)酶解成小肽片段用于基質(zhì)輔助激光解吸電離串聯(lián)質(zhì)譜(MAIDI-Q-TOF MS/MS)分析。質(zhì)譜數(shù)據(jù)通過MASCOT軟件檢索后，得到蛋白質(zhì)的詳細(xì)信息用于后續(xù)分析。對(duì)質(zhì)譜鑒定出的蛋白質(zhì)進(jìn)行RT-PCR和Wstem的驗(yàn)證。 結(jié)論：應(yīng)用基質(zhì)輔助激光解吸電離串聯(lián)質(zhì)譜對(duì)差異表達(dá)的蛋白質(zhì)點(diǎn)進(jìn)行鑒

4、定，成功鑒定出18種蛋白質(zhì)。脊髓損傷3 d后表達(dá)上調(diào)的蛋白質(zhì)有巨噬細(xì)胞游走抑制因子、S期激酶相關(guān)蛋白1、熱休克蛋白27、多配體蛋白聚糖3、T細(xì)胞受體β鏈可變區(qū)、膜聯(lián)蛋白Ⅲ、腺苷酸激酶1、半乳凝素3、丙酮酸脫氫酶、磷脂酶B、嗜鉻粒蛋白A、熱休克蛋白70凝結(jié)蛋白1；同時(shí)表達(dá)下調(diào)的蛋白質(zhì)有磷酸丙糖異構(gòu)酶、神經(jīng)鞘氨醇磷酸化受體、熱休克蛋白10、肽酰.脯氨酰-順反式異構(gòu)酶A。多數(shù)差異蛋白質(zhì)涉及到神經(jīng)細(xì)胞的增殖、凋亡、應(yīng)激反應(yīng)等過程，為進(jìn)一步闡明中