移植的人骨髓基質細胞在體內分布與安全性評價的實驗研究.pdf

1、目的 在建立人骨髓基質細胞培養(yǎng)體系基礎上，觀察人骨髓基質細胞在裸鼠體內的分布情況和對臟器的影響，為人骨髓基質細胞作為干細胞移植的前期研究和安全性提供實驗依據(jù)。 方法 采用密度梯度離心結合差速貼壁法分離培養(yǎng)人骨髓基質細胞，通過細胞形態(tài)學、表型特征對成人骨髓來源的基質細胞進行鑒定；采用細胞生長曲線分析和成骨誘導分化分析其體外增殖特性和分化潛能。而后建立人骨髓基質細胞靜脈移植的裸鼠模型，觀察受體裸鼠的一般情況，通過組織

2、學分析、RT-PCR檢測人Alu基因和CD45基因等技術手段，研究移植的骨髓基質細胞體內的分布情況和對臟器的影響。此外，還進行安全性檢測，包括長期傳代培養(yǎng)的觀察和成瘤性實驗檢測。 結果 體外培養(yǎng)的人骨髓基質細胞為成纖維樣細胞，細胞緊密排列呈漩渦狀生長；流式細胞術檢測CD34、CD45為陰性表達；細胞生長曲線提示第1至第5代人骨髓基質細胞增殖速度無顯著性差異(P>0.05)；成骨誘導18天后，茜素紅染色可見橙紅色鈣結節(jié)。在

3、裸鼠移植模型中，輸注第4代體外培養(yǎng)的人骨髓基質細胞后，受體裸鼠一般狀況良好，解剖大體觀、HE染色、瑞氏染色觀察受體組織結構無異常。RT-PCR檢測人Alu基因、CD45基因在不同移植時間相應臟器均有表達。此外，細胞長期傳代后出現(xiàn)衰老征象，而無明顯的成瘤特性。 結論 采用密度梯度離心結合差速貼壁法分離、DMEM-LG-10％FBS培養(yǎng)液可成功分離培養(yǎng)含有間充質干細胞的人骨髓基質細胞群。經靜脈輸注后，在不同移植時間檢測，發(fā)現(xiàn)