神經(jīng)干細(xì)胞相關(guān)抗原在SD大鼠腦及O-2A譜系細(xì)胞的表達(dá)研究.pdf

1、第一部分，神經(jīng)干細(xì)胞相關(guān)抗原在SD大鼠腦組織的表達(dá)
　　 目的:觀察分析NG2、CD15與nestin在不同時期SD大鼠腦組織中的表達(dá)變化情況。
　　 方法:將出生后7天和3個月的兩組SD大鼠麻醉后進(jìn)行灌注、固定、取腦,4％多聚甲醛后固定4小時后入10%、20%蔗糖脫水后，依照徐州醫(yī)學(xué)院王平宇編著的《大鼠腦讀片提要及圖譜》進(jìn)行冰凍切片。對神經(jīng)干細(xì)胞相關(guān)抗原(nestin，CD15，NG2)和O-2A譜系特異性標(biāo)記物A28

2、5分別進(jìn)行免疫熒光組織化學(xué)染色研究，觀察表達(dá)差異。
　　 結(jié)果:7天組和3個月組的腦組織中，腦皮質(zhì)和腦髓質(zhì)中幾乎觀察不到nestin和CD15陽性細(xì)胞，而在SVZ和海馬齒狀回附近集中表達(dá)，表達(dá)量隨著鼠齡的增長略微有些減少；NG2在不同腦區(qū)均有發(fā)現(xiàn)，與早期腦組織不同的是，成熟的腦組織在室管膜下區(qū)NG2表達(dá)減少，而在SVZ區(qū)周圍的實質(zhì)部分大量表達(dá)NG2。
　　 結(jié)論:神經(jīng)干細(xì)胞發(fā)育過程中會向腦組織周邊遷移，表面抗原nesti

3、n消失的最快，其次是CD15，NG2發(fā)育過程中消失的最慢或者不消失。
　　 第二部分，神經(jīng)干細(xì)胞相關(guān)抗原在O-2A譜系膠質(zhì)細(xì)胞中的表達(dá)
　　 目的:觀察分析神經(jīng)干細(xì)胞相關(guān)抗原NG2、CD15與nestin在O-2A譜系膠質(zhì)細(xì)胞中的表達(dá)變化情況。
　　 方法:根據(jù)O-2A譜系細(xì)胞的生長時間差異及細(xì)胞的粘附特性不同，采用振蕩法和差速貼壁法，并結(jié)合使用含生長因子的無血清培養(yǎng)基以獲得純化的O-2A祖細(xì)胞，將O-2A祖細(xì)胞

4、用生長因子培養(yǎng)基誘導(dǎo)分化為T2A后，對培養(yǎng)1d和2d的O-2A和培養(yǎng)純化1d和3d的T2A分別進(jìn)行nestin，CD15，NG2和A285的免疫熒光檢測。
　　 結(jié)果:nestin在OPC(1d，2d)表達(dá)較強(qiáng)，在T2A培養(yǎng)早期(1d)也有表達(dá)但已稍減少（僅有70-80%表達(dá)），在T2A分化成熟階段（3d后）幾乎不見nestin表達(dá)。同樣，CD15在OPC比T2A表達(dá)強(qiáng)，但有意思的是，在分化成熟的T2A中CD15雖表達(dá)減少但并未