苯海索對β-淀粉樣蛋白-,25-35-介導的PC12細胞損傷的保護作用及其機制研究.pdf

1、目的：探討苯海索(Trihexyphenidyl，THY)對Aβ25-35(β-淀粉樣蛋白25-35，beta-amyloidprotein25-35)介導的PC12細胞(大鼠嗜鉻細胞瘤細胞，pheochromocytomacell)損傷的保護作用及其可能機制。 方法：運用不同濃度的Aβ25-35(1，10，20，30，50μM)對PC12細胞進行損傷，通過MTT法了解PC12細胞的損傷情況，確定出引起細胞損傷的最佳作用濃度，研

2、究苯海索和對照品維生素E的細胞保護作用；采用MDA，SOD以及GSH-PX等試劑盒檢測Aβ25-35對PC12細胞的氧化損傷，并研究苯海索的抗氧化作用及其機制，為進一步確定苯海索的抗氧化特性，使用DCFH-DA結(jié)合熒光分光光度計檢測細胞內(nèi)ROS的水平；采用吖啶橙染色和熒光倒置顯微鏡觀察PC12細胞凋亡形態(tài)，用熒光分光光度計結(jié)合Rh123檢測細胞線粒體膜電位的水平變化，并用鈣離子敏感的熒光探針Fura-2/AM檢測細胞內(nèi)游離Ca2+濃度進

3、一步研究苯海索的鈣拮抗作用。 結(jié)果：1，10μM的凝聚態(tài)Aβ25-35與PC12細胞共同孵育48小時可造成顯著損傷，而濃度為0.01μM，0.1μM，1μM的苯海索可明顯改善細胞形態(tài)，顯著提高PC12細胞的存活率，分別達到70.41％，73.46％，86.66％，且呈濃度依賴性。2，Aβ25-35可誘導PC12細胞氧化損傷，提高細胞內(nèi)ROS水平，顯著降低細胞內(nèi)SOD和GSH-PX酶的活性，提高MDA的含量，觸發(fā)細胞內(nèi)的氧化應激損

4、傷，苯海索可顯著降低細胞內(nèi)ROS水平和MDA含量，顯著升高細胞內(nèi)SOD和GSH-PX的活性，對PC12細胞有顯著的抗氧化作用。3，熒光倒置顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，10μM的Aβ25-35與PC12細胞共同孵育24小時，凋亡細胞顯著增加，不同濃度的苯海索預處理1小時，可使細胞形態(tài)明顯改善；通過測定細胞內(nèi)熒光染料羅丹明123(Rh123)的熒光強度反映細胞線粒體膜電位的變化，不同濃度的苯海索可顯著抑制Aβ25-35引起的線粒體膜電位水平的降低；通過

5、檢測細胞內(nèi)游離Ca2+濃度的變化表明苯海索可顯著抑制Ap25-35介導的細胞內(nèi)Ca2+超載。 結(jié)論：1，10μM的Aβ25-35可介導PC12細胞損傷，觸發(fā)氧化應激反應，誘導細胞凋亡，引發(fā)細胞內(nèi)Ca2+濃度超載，最終導致細胞死亡。2，不同濃度的苯海索預處理1小時可明顯抑制Aβ25-35誘導的細胞損傷和凋亡。苯海索的神經(jīng)保護作用可能是通過清除細胞內(nèi)ROS，提高細胞內(nèi)SOD和GSH-PX的活性，降低MDA的水平，抑制細胞凋亡以及細胞