趨化因子受體CCR4在膽囊癌中的表達及其功能研究.pdf

1、大多數(shù)膽囊癌患者確診時已屬于晚期，做為膽道系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤，膽囊癌預后很差，原因是膽囊癌極易浸潤及轉(zhuǎn)移，因此研究膽囊癌轉(zhuǎn)移的相關機制，對膽囊癌轉(zhuǎn)移的預防和治療具有重要意義。越來越多的證據(jù)表明，趨化因子及其受體與腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移相關。有研究表明，血液系統(tǒng)惡性腫瘤及原發(fā)性胃癌的轉(zhuǎn)移中，趨化因子受體CCR4均扮演一定重要的角色。但是，CCR4在膽囊癌侵襲、轉(zhuǎn)移過程中所起的作用的機制，到目前為止，尚未見報道。本課題利用shRNA干擾技術沉默

2、CCR4基因，研究CCR4對膽囊癌細胞周期、增殖、侵襲和遷移運動能力的影響，探討趨化因子受體CCR4在膽囊癌組織中表達及CCR4與膽囊癌臨床預后的關系，以尋求膽囊癌治療的新途徑。
　　 第一部分CCR4的表達與膽囊癌生物學特征之間的關系
　　 目的：研究人膽囊癌細胞在利用siRNA干擾沉默趨化因子CCR4基因后，增殖、周期、侵襲和遷移運動能力的變化。
　　 方法：不同人膽囊癌細胞CCR4的表達水平用Western

3、 blot檢測，膽囊癌細胞GBC-SD用慢病毒感染，CCR4基因用siRNA-CCR4沉默，干擾效果用Western-blot鑒定。膽囊癌細胞GBC-SD分為三組：GBC-SD、GBC-SD/CCR4-RNAi及GBC-SD/control細胞，這三組細胞用CCR4的配體CCL17(趨化因子)作用。三組細胞的增殖能力用CCK-8法檢測；細胞周期用流式細胞儀檢測；細胞遷移和侵襲能力用Transwell小室運動侵襲試驗檢測；Western

4、blot方法檢測CCR4基因沉默對其相應配體CCL17和CCL22蛋白表達的影響。
　　 結(jié)果：沉默CCR4基因，對膽囊癌細胞GBC-SD的細胞周期及增殖均無影響，但是能明顯抑制GBC-SD細胞的侵襲及運動遷移的能力，CCR4基因的沉默，并不能影響腫瘤細胞CCL17和CCL22基因的表達。
　　 結(jié)論：膽囊癌細胞GBC-SD表達趨化因子受體CCR4，CCR4與膽囊癌細胞的生長和增殖無關，卻可以促進膽囊癌細胞GBC-SD的

5、侵襲和轉(zhuǎn)移。
　　 第二部分 CCR4在膽囊癌組織中的表達及其臨床意義
　　 目的：研究在膽囊癌組織中CCR4的表達，以及CCR4與臨床病理因素間的相互關系、及其對膽囊癌預后的影響。
　　 方法：CCR4在膽囊癌組織標本及慢性膽囊炎膽囊粘膜組織標本中的表達情況用免疫組織化學法檢測，分析時結(jié)合臨床資料進行，應用Kaplan-Meier法進行CCR4表達陽性組與陰性組生存分析，組間分析應用log-rank檢驗，采用C

6、ox回歸多因素模型進行多因素分析，CCR4在膽囊癌組織中的表達與臨床病理因素的相關性采用x2檢驗。
　　 結(jié)果：膽囊癌細胞胞漿和/或胞膜有CCR4表達，呈棕黃色，在膽囊癌中，CCR4蛋白的表達明顯高于慢性膽囊炎膽囊上皮組織(P<0.001)。CCR4的高表達與膽囊癌病人的性別、年齡、病理分級、遠處轉(zhuǎn)移及神經(jīng)淋巴管侵犯等因素無關，而與腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(p=0.015)及組織學分級有關(P=0.042)。CCR4陽性組與陰性組術后生存