胚胎干細(xì)胞分泌生長因子的檢測以及對于創(chuàng)傷愈合作用的初步探討.pdf

1、目的：研究了胚胎干細(xì)胞分泌的細(xì)胞生長因子對于創(chuàng)傷愈合的影響。 方法：使用間接免疫熒光染色的方法鑒定胚胎干細(xì)胞，檢測的指標(biāo)包括SSEA-1，SSEA-3,SSEA-4,TRA-1-60，TRA-1-81，OCT-4，同時使用免疫組化方法檢測了AKP；使用ELISA法測定胚胎干細(xì)胞分泌的四種與創(chuàng)傷愈合相關(guān)的細(xì)胞生長因子的分泌趨勢、含量以及穩(wěn)定性；采用兩種不同的創(chuàng)傷模型來評價胚胎干細(xì)胞分泌的細(xì)胞生長因子對于創(chuàng)傷愈合的作用。 第

2、一種采用SD大鼠燙傷模型，使用胚胎干細(xì)胞分泌的細(xì)胞生長因子噴霧劑治療，使用含硫酸慶大霉素的無菌生理鹽水噴霧劑作為對照組； 第二種采用新西蘭家兔切割創(chuàng)傷模型，使用冰凍干燥法將胚胎干細(xì)胞分泌的細(xì)胞生長因子濃縮形成粉末作為治療組，使用氨芐青霉素粉末作為對照，兩種模型均通過比較兩組創(chuàng)傷愈合的時間來加以評價。 結(jié)果：免疫組化染色結(jié)果顯示，測定的細(xì)胞表達SSEA-1，SSEA-3,SSEA-4,TRA-1-60，TRA-1-81，O

3、CT-4，AKP，證實其為胚胎干細(xì)胞；這些胚胎干細(xì)胞能分泌與創(chuàng)傷愈合相關(guān)的四種細(xì)胞生長因子，且在培養(yǎng)的第5天達到峰值，PDGF、VEGF、EGF、bFGF的峰值分別為：148.9±18.1，198.4±25.2,170.8±30.7，38.2±7.5(pg/ml)，然后降低。生長因子濃度的測定顯示：3批培養(yǎng)液中PDGF、VEGF、EGF、bFGF平均含量依次為225.0±19.9、163.0±10.3、255.0±19.4、47.0±3

4、.7(pg/ml)；穩(wěn)定性檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，30天后，儲存在-20℃、4℃、和25℃條件下的細(xì)胞生長因子平均含量分別為：PDGF，207±11.9、160.9±23.0、149.2±41.4；VEGE，146.1±43.5、116.3±20.2、112.5±29.6；EGF，245±21.1、169.9±23.4、161.1±29.5；bFGF，37.0±16.9、27.4±7.0、23.9±6.7(pg/ml).療效顯示，對于SD大鼠燙傷

5、模型，胚胎干細(xì)胞分泌的生長因子噴霧劑組的平均愈合時間為27±3天，無菌生理鹽水對照組為25±6天，兩組比較P>0.05，無統(tǒng)計學(xué)差異；對于家兔創(chuàng)傷模型，胚胎干細(xì)胞分泌生長因子冰凍干燥治療組平均愈合天數(shù)為11±2天，氨芐青霉素對照組為13±1天，兩組比較t<0.05,有統(tǒng)計學(xué)差異。 結(jié)論：胚胎干細(xì)胞分泌的細(xì)胞生長因子噴霧劑有促進創(chuàng)傷愈合的趨勢；胚胎干細(xì)胞分泌的細(xì)胞生長因子冰凍干燥粉經(jīng)實驗證實能促進創(chuàng)傷愈合，這些細(xì)胞因子在低溫下能保