竹節(jié)參皂苷Ⅴ對LPS誘導小鼠肝臟及巨噬細胞系炎癥的保護作用機制研究.pdf

1、目的:利用LPS建立小鼠肝臟炎癥和RAW264.7巨噬細胞系炎癥模型,研究竹節(jié)參皂苷Ⅴ的保護作用并探索其抗炎作用機制。
　　方法:
　　①摸索LPS刺激小鼠炎癥模型用藥劑量及時間,采用竹節(jié)參皂苷Ⅴ保護小鼠后,檢測小鼠肝臟指數(shù)及小鼠肝臟功能指標。
　　②小鼠肝臟HE染色觀察小鼠肝臟形態(tài)學變化。
　?、鄄捎肕TT比色法,觀察竹節(jié)參皂苷Ⅴ對RAW264.7細胞的有效濃度范圍。
　?、懿捎肎reiss試劑檢測NO的

2、釋放,確定LPS刺激RAW264.7細胞的最佳刺激濃度及時間,并觀察竹節(jié)參皂苷Ⅴ對LPS致RAW264.7細胞釋放NO的保護作用。
　?、軪lisa技術(shù)檢測細胞上清及小鼠血清中TNF-α和IL-1β的水平;RT-PCR法檢測小鼠肝臟及巨噬細胞iNOS、TNF-α、IL-1βmRNA表達及細胞CD14和TLR4 mRNA表達水平。
　?、轜estern Blot技術(shù)檢測小鼠肝臟及細胞NF-κBp65、P-ERK、P-JNK和P

3、-p38等蛋白的表達水平。
　　結(jié)果:
　?、僦窆?jié)參皂苷Ⅴ能降低LPS引起的小鼠肝功能指標以及肝臟指數(shù)。
　?、谥窆?jié)參皂苷Ⅴ能改善LPS所致小鼠的肝臟炎癥損傷。
　?、壑窆?jié)參皂苷Ⅴ對RAW264.7活力沒有影響。
　?、艹鹾Y結(jié)果表明LPS能顯著提高RAW264.7細胞NO量的釋放,當LPS濃度為1μg/mL時,NO釋放量與正常組有顯著性差異。竹節(jié)參皂苷Ⅴ對LPS致RAW264.7細胞NO量的釋放有顯著的降低

4、作用。
　　⑤竹節(jié)參皂苷Ⅴ對LPS致小鼠肝炎及細胞中iNOS、TNF-α、IL-1β的釋放有顯著的抑制作用,且細胞實驗中竹節(jié)參皂苷Ⅴ對CD14和TLR4 mRNA表達也有抑制效果。
　　⑥竹節(jié)參皂苷Ⅴ能顯著降低組織中NF-κBp65、P-ERK、P-p38、P-JNK蛋白的表達量及細胞中NF-κBp65、P-ERK、P-JNK蛋白的表達,但在巨噬細胞中對 P-p38無明顯作用。
　　結(jié)論:竹節(jié)參皂苷Ⅴ具有良好的抗炎效果