Avastin抑制兔眼視網(wǎng)膜新生血管的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、視網(wǎng)膜新生血管形成(retinal neovascularization,RNV)是年齡相關(guān)性黃斑變性(age-related macular degeneration,AMD)、糖尿病視網(wǎng)膜病變及視網(wǎng)膜靜脈阻塞等多種眼底疾病導(dǎo)致視力不可逆,嚴(yán)重喪失的主要原因之一。
　　其發(fā)病機(jī)制非常復(fù)雜,目前為止,尚無(wú)統(tǒng)一說(shuō)法,許多學(xué)者對(duì)眼底視網(wǎng)膜新生血管性疾病的發(fā)病機(jī)制和治療方法提出了很多新觀點(diǎn),如血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endo

2、thelial cell growth factor,VEGF)的作用等。抗VEGF藥物Avastin在臨床應(yīng)用中日益增多,且已取得令人鼓舞的結(jié)果。
　　Avastin由美國(guó)生物科技公司基因技術(shù)公司(Genentech)研制,是人源化抗VEGF重組鼠單克隆抗體,其分子結(jié)構(gòu)主要由人的框架區(qū)IgG1和鼠單克隆抗體抗原結(jié)合互補(bǔ)決定區(qū)組成,能阻止VEGF與血管內(nèi)皮細(xì)胞表面受體結(jié)合,從而抑制內(nèi)皮細(xì)胞有絲分裂,阻礙新生血管形成。
　　本

3、試驗(yàn)旨在成功建立兔眼視網(wǎng)膜新生血管動(dòng)物模型、觀察玻璃體腔內(nèi)注射Avastin治療兔眼視網(wǎng)膜新生血管的療效,為臨床治療提供依據(jù)。
　　材料與方法：
　　選取健康有色家兔為試驗(yàn)對(duì)象,應(yīng)用電凝器分別對(duì)兔雙眼視盤(pán)兩側(cè)集束狀視網(wǎng)膜血管進(jìn)行電凝,建立兔RNV模型。電凝2W后,經(jīng)FFA檢查和病理組織切片光鏡檢查證實(shí)有視網(wǎng)膜新生血管形成,選取36只(72眼)兔視網(wǎng)膜新生血管眼,隨機(jī)分為治療組和對(duì)照組。治療組玻璃體腔內(nèi)注射Avastin1.2

4、5mg/0.05ml,對(duì)照組玻璃體腔內(nèi)注射BSS0.05ml。注射后1W、2W及4W各處死動(dòng)物12只,摘除眼球,10只制作石蠟切片,兩只行電鏡檢查。免疫組織化學(xué)檢查對(duì)VEGF因子和FⅧ-Rag蛋白表達(dá)進(jìn)行灰度值檢測(cè)。正常眼(8眼)為正常對(duì)照組。
　　結(jié)果：
　　1.兔雙眼視盤(pán)兩側(cè)視網(wǎng)膜血管電凝2周后,經(jīng)FFA檢查和病理組織切片光鏡檢查證實(shí)有視網(wǎng)膜新生血管形成。電凝兔眼80眼,排除外形正常眼底未見(jiàn)視網(wǎng)膜新生血管形成者6眼,電凝

5、處?kù)柲ご┛渍?眼,本試驗(yàn)視網(wǎng)膜新生血管模型成功率為90％。
　　2.FFA顯示和眼底彩照:治療組用藥1W后熒光滲漏消失,2W及4W復(fù)查FFA未見(jiàn)新生血管復(fù)發(fā),熒光滲漏消失;對(duì)照組1W、2W及4W FFA檢查造影早期(動(dòng)脈前期或動(dòng)脈期)即顯示熒光迅速滲漏,后期形成高熒光;治療組用藥1W后眼底彩照顯示視網(wǎng)膜新生血管消退;2W及4W觀察眼底,未見(jiàn)新生血管復(fù)發(fā)。對(duì)照組1W、2W及4W觀察眼底時(shí)發(fā)現(xiàn)新生血管范圍擴(kuò)大。
　　3.免疫組織

6、化學(xué)檢測(cè):色素兔眼視網(wǎng)膜新生血管動(dòng)物模型玻璃體腔內(nèi)注射Avastin1.25mg/0.05ml后,1W、2W及4W時(shí)與對(duì)照組相比,免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示:治療組VEGF因子表達(dá)的灰度值與對(duì)照組相比明顯減少,FⅧ-Rag蛋白表達(dá)的灰度值與對(duì)照組相比明顯減少。
　　4.光鏡和電鏡顯示:注射后1W、2W及4W時(shí)與對(duì)照組相比,治療組光鏡切片中突破視網(wǎng)膜內(nèi)界膜的毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)目較對(duì)照組降低。觀察注射后組織學(xué)和超微結(jié)構(gòu)無(wú)明顯異常。

7、>　　結(jié)論：
　　1.應(yīng)用電凝器電凝兔眼視盤(pán)兩側(cè)集束狀視網(wǎng)膜血管的方法,2周后可以成功建立視網(wǎng)膜新生血管模型。
　　2.FFA顯示和眼底彩照檢查可以有效觀察到Avastin治療前、后新生血管的消退情況。
　　3.組織學(xué)檢查,顯示Avastin在治療視網(wǎng)膜新生血管的同時(shí),光鏡和電鏡下沒(méi)有觀察到視網(wǎng)膜毒性的明顯證據(jù)。
　　4.抗VEGF藥物Avastin玻璃體腔內(nèi)注射治療實(shí)驗(yàn)性RNV,療效顯著,可作為臨床視網(wǎng)膜新生血