喹硫平對(duì)慢性酒精暴露C57BL-6小鼠認(rèn)知及腦白質(zhì)的影響.pdf

1、背景：
　　腦白質(zhì)在大腦內(nèi)部由神經(jīng)纖維聚集而成，控制著神經(jīng)元共享訊號(hào)，協(xié)調(diào)各腦區(qū)之間的正常運(yùn)作，參與情感、認(rèn)知、記憶以及視覺(jué)空間等功能的形成;慢性飲酒可造成腦白質(zhì)不同程度的損傷，而近期的一些研究表明抗精神病藥喹硫平能夠促進(jìn)腦白質(zhì)少突膠質(zhì)細(xì)胞發(fā)育、髓鞘修復(fù);因此，研究喹硫平在酒精所致腦白質(zhì)損傷中的作用對(duì)慢性酒精濫用所致腦白質(zhì)損傷的臨床預(yù)防及治療具有重要的意義。
　　目的：
　　1.通過(guò)測(cè)評(píng)喹硫平對(duì)慢性酒精暴露C57BL/

2、6小鼠學(xué)習(xí)記憶能力以及胼胝體髓鞘形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響，探討喹硫平對(duì)慢性酒精暴露小鼠認(rèn)知功能和白質(zhì)損傷的影響。2.通過(guò)測(cè)定喹硫平對(duì)慢性酒精暴露C57BL/6小鼠胼胝體區(qū)髓鞘堿性蛋白(myel-ine basic protein，MBP)、少突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白(myelin oligodendrocyte glycoprotein，MOG)、少突膠質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子-2(oligodendrocyte transcription factor-2，Ol

3、ig2)表達(dá)的影響，探討喹硫平對(duì)酒精暴露小鼠腦白質(zhì)損傷及認(rèn)知功能影響作用的分子機(jī)制。
　　方法：
　　1.雄性C57BL/6小鼠140只經(jīng)水迷宮測(cè)試篩選出學(xué)習(xí)記憶成績(jī)無(wú)顯著差異的小鼠120只，運(yùn)用隨機(jī)數(shù)字表法分為6組（正常對(duì)照組、喹硫平空白對(duì)照組、酒精暴露模型組、喹硫平5mg·kg-1·d-1低劑量干預(yù)組、喹硫平10mg·kg-1·d-1中劑量干預(yù)組、喹硫平15mg·kg-1·d-1高劑量干預(yù)組），每組20只。酒精暴露模型組

4、及喹硫平干預(yù)組自由飲用體積分?jǐn)?shù)為10％的酒精水溶液20周，喹硫平干預(yù)組在飲用酒精水溶液6周后分別加入5mg·kg-1·d-1、10mg·kg-1·d-1、15mg·kg-1·d-1的喹硫平干預(yù)至20周，喹硫平空白對(duì)照組飲用蒸餾水6周后改為10mg·kg-1·d-1的喹硫平水溶液至20周，正常對(duì)照組飲用蒸餾水20周。
　　2.造模后，部分小鼠采用Morris水迷宮測(cè)試比較認(rèn)知行為的差異，其余小鼠處死取腦，分別采用勞克堅(jiān)牢藍(lán)（luxo

5、l fast blue，LFB）染色、電子顯微鏡觀察各組小鼠胼胝體髓鞘形態(tài)以及超微結(jié)構(gòu)的差異;免疫熒光法檢測(cè)小鼠胼胝體髓鞘堿性蛋白(myeline basic protein，MBP)、少突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白(myelin oligodendrocyte glycopro-tein，MOG)蛋白表達(dá)差異;采用半定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Reverse Transcription Polym-erase Chain Reaction，RT-PCR)

6、技術(shù)檢測(cè)各組小鼠MBP、MOG、少突膠質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子-2（oligodendrocyte transcription factor-2，Olig2）mRNA的表達(dá)。
　　3.實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS20.0軟件包統(tǒng)計(jì)分析，實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)以(x)±s表示，采用單因素方差分析，Levene檢驗(yàn)進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，若方差齊采用最小顯著差值法(leastsignificant difference，LSD)，方差不齊采用Dunnett T3方法進(jìn)

7、行各組與正常對(duì)照組和酒精暴露模型組組間的兩兩比較，數(shù)據(jù)結(jié)果采用雙側(cè)檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。
　　結(jié)果：
　　1.Morris水迷宮測(cè)試結(jié)果:小鼠學(xué)習(xí)記憶測(cè)試結(jié)果組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=4.702，P=0.002);酒精暴露模型組與正常對(duì)照組相比學(xué)習(xí)記憶成績(jī)明顯下降(P＜0.05);喹硫平低、中劑量干預(yù)組與酒精暴露模型組相比差異均無(wú)顯著性;喹硫平高劑量干預(yù)組學(xué)習(xí)記憶成績(jī)高于酒精暴露模型組(P＜0.05);喹硫平空白對(duì)照組

8、學(xué)習(xí)記憶成績(jī)與正常對(duì)照組相比差異無(wú)顯著性。
　　2.形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果: LFB染色及電鏡結(jié)果顯示酒精暴露模型組、喹硫平低劑量干預(yù)組與正常對(duì)照組相比胼胝體髓鞘有明顯的損傷;喹硫平中、高劑量干預(yù)組與酒精暴露模型組相比髓鞘完整性有明顯的改善;喹硫平空白對(duì)照組與正常對(duì)照組相比無(wú)明顯差別。
　　3.免疫熒光結(jié)果:小鼠胼胝體MBP、MOG表達(dá)組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(MBP:F=12.237，P＜0.05; MOG: F=18.275，P＜

9、0.05);酒精暴露模型組MBP、MOG表達(dá)明顯低于對(duì)照組（均P＜0.05）;喹硫平低劑量干預(yù)組與酒精暴露模型組相比MBP、MOG表達(dá)差異無(wú)顯著性;中、高劑量喹硫平干預(yù)組MBP、MOG表達(dá)均高于酒精暴露模型組（均P＜0.05）;喹硫平空白對(duì)照組與正常對(duì)照組相比MBP、MOG表達(dá)差異均無(wú)顯著性。
　　4.RT-PCR結(jié)果:小鼠胼胝體MBP、MOG、Olig2 mRNA表達(dá)組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(MBP:F=8.592,P＜0.05;

10、 MOG:F=25.558,P＜0.05; Olig2:F=9.652,P＜0.05);酒精暴露模型組MBP、MOG、Olig2 mRNA表達(dá)明顯低于對(duì)照組(均P＜0.05);喹硫平低劑量干預(yù)組與酒精暴露模型組相比MBP、MOG、Olig2 mRNA表達(dá)差異無(wú)顯著性;中、高劑量喹硫平干預(yù)組MBP、MOG、Olig2 mRNA表達(dá)均高于酒精暴露模型組（均P＜0.05）;喹硫平空白對(duì)照組與正常對(duì)照組相比MBP、MOG、Olig2 mRNA表