聚醚醚酮-羥基磷灰石-碳纖維復(fù)合材料的體外細(xì)胞相容性研究.pdf

1、目的：
　　 研究不同組份聚醚醚酮.羥基磷灰石.碳纖維復(fù)合材料的細(xì)胞毒性及對(duì)成骨細(xì)胞生物學(xué)行為的影響
　　 材料與方法
　　 1、獲得高純度鼠成骨細(xì)胞培養(yǎng)方法的研究:取出生時(shí)間小于24小時(shí)的SD大鼠5只,采用多次酶消化法進(jìn)行體外細(xì)胞培養(yǎng)。倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)；繪制成骨細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。經(jīng)堿性磷酸酶染色和茜素紅染色鑒定成骨細(xì)胞,分析成骨細(xì)胞純度和礦化能力。
　　 2、聚醚醚酮-羥基磷灰石-碳纖維復(fù)合材料對(duì)

2、成骨細(xì)胞的毒性研究:根據(jù)IS010993-5標(biāo)準(zhǔn)制備材料的浸提液,將不同組份復(fù)合材料的浸提液與大鼠成骨細(xì)胞共同培養(yǎng),分別于培養(yǎng)第3、5、7天,應(yīng)用CCK-8試劑盒測(cè)定成骨細(xì)胞的活性,計(jì)算相對(duì)增殖率,依據(jù)增殖率評(píng)價(jià)材料對(duì)細(xì)胞的毒性。
　　 3、聚醚醚酮-羥基磷灰石-碳纖維復(fù)合材料對(duì)成骨細(xì)胞生物學(xué)行為影響的研究:在聚醚醚酮復(fù)合材料上接種大鼠成骨細(xì)胞并培養(yǎng)1-14天,測(cè)定細(xì)胞4小時(shí)的黏附情況；分別于第1、3、7天應(yīng)用流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞

3、周期,計(jì)算細(xì)胞增殖指數(shù)；應(yīng)用熒光實(shí)時(shí)逆轉(zhuǎn)錄PCR測(cè)定復(fù)合成長(zhǎng)第14天的成骨細(xì)胞的堿性磷酸酶(alkalinephosphatase,ALP)、骨鈣素(osteocalcin,OCN)、Ⅰ型膠原酶(Type Ⅰ collagen,COL-Ⅰ)的mRNA表達(dá)；應(yīng)用掃描電鏡觀察復(fù)合生長(zhǎng)的成骨細(xì)胞的形態(tài)和結(jié)構(gòu)的變化。
　　 結(jié)果：
　　 1、原代提取的成骨細(xì)胞呈圓形懸浮在培養(yǎng)液中,2小時(shí)開(kāi)始貼壁。培養(yǎng)3天后,細(xì)胞呈三角形、多角形

4、及不規(guī)則形,胞核偏向一側(cè)。絕大部分細(xì)胞(95％以上)堿性磷酸酶染色呈陽(yáng)性,經(jīng)茜素紅染色呈紅色礦化結(jié)節(jié)。
　　 2、各種不同組分材料的聚醚醚酮-羥基磷灰石-碳纖維復(fù)合材料的浸提液在不同時(shí)期的毒性分級(jí)均在0～1級(jí)之間,可見(jiàn)不同組份聚醚醚酮.羥基磷灰石.碳纖維復(fù)合材料的浸提液無(wú)細(xì)胞毒性作用。
　　 3、不同聚醚醚酮復(fù)合材料的黏附性無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；成骨細(xì)胞在較高羥基磷灰石含量的聚醚醚酮復(fù)合材料的增殖指數(shù)高于其它組。ALP mR

5、NA、COL-ⅠmRNA的表達(dá)隨著PEEK-HA-CF復(fù)合材料中HA含量的增加而增多。BGP mRNA在各組中的表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。通過(guò)掃描電鏡觀察復(fù)合材料成骨細(xì)胞形態(tài)發(fā)現(xiàn):培養(yǎng)14天時(shí),羥基磷灰石含量高組(質(zhì)量分?jǐn)?shù)為20％)表面成骨細(xì)胞周圍形成大量類骨樣結(jié)節(jié),明顯高于其他組,有利于骨形成。
　　 結(jié)論：
　　 1、利用階段酶消化法分離提取的成骨細(xì)胞具有典型的成骨細(xì)胞特性,獲得的成骨細(xì)胞純度高、增殖能力強(qiáng),