電磁場刺激自體骨髓間充質(zhì)干細胞經(jīng)皮注射治療大鼠脛腓骨骨折的實驗研究.pdf

1、目的：
　　 1.研究強度為1.0mT電磁場對大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞體外凋亡，增殖以及FGF-2和FGFR-2 mRNA表達的影響。
　　 2.研究經(jīng)皮注射接受頻率為15Hz、強度為1.0mT電磁場曝磁處理的自體骨髓間充質(zhì)干細胞對大鼠脛腓骨骨折愈合的影響。
　　 方法：
　　 1.體外分離培養(yǎng)SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞（BMSCs），倒置相差顯微鏡觀察細胞形態(tài)及生長特征。取第3代細胞，按電磁場頻率及作用時間的

2、不同分組，接受強度為1.0mT的電磁場曝磁處理。研究電磁場對細胞凋亡和增殖的影響，繪制出生長曲線，采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應（RT-PCR）技術檢測各組細胞的FGF-2和FGFR-2 mRNA表達，并進行定量分析。
　　 2．將30只SD大鼠，隨機分為BMSCs+EMF組，BMSCs組和對照組。麻醉下抽取股骨骨髓，貼壁法分離純化獲取骨髓間充質(zhì)干細胞，體外培養(yǎng)至第三代。BMSCs+EMF組大鼠的骨髓間充質(zhì)干細胞接受頻率為15Hz、強

3、度為1.0mT的電磁場刺激，BMSCs組大鼠的骨髓間充質(zhì)干細胞進行假刺激。建立大鼠右側(cè)脛腓骨中段骨折模型。將BMSCs+EMF組和BMSCs組的自體骨髓間充質(zhì)干細胞經(jīng)皮注入骨折部位，對照組注入等體積生理鹽水。分別于術后當日及第1,2,3,4周末，拍攝Ｘ線片評價骨折愈合情況；相同時間點鼠尾靜脈取血，采用對硝基苯磷酸鹽法檢測血清堿性磷酸酶（ALP）活性，酶聯(lián)免疫吸附法檢測大鼠血清骨鈣素（BGP）含量，于術后第2,4周末行病理學切片檢查，觀察

4、骨痂組織學變化。
　　 結(jié)果：
　　 1.經(jīng)電磁場刺激的骨髓間充質(zhì)干細胞仍呈長梭形或多邊形，細胞生長曲線呈S形。與非刺激組相比，刺激組細胞生長旺盛，其中頻率為15Hz，強度為1mT的電磁場每天刺激2小時促進細胞增殖效果最明顯，該組細胞FGF-2和FGFR-2 mRNA的表達量較非刺激組也顯著增高。
　　 2.與對照組相比，BMSCs+EMF組大鼠血清中ALP活性提高（P<0.05），血清中BGP的含量增加（P<0

5、.05），在4周內(nèi)骨折區(qū)域新生骨的數(shù)量和質(zhì)量明顯優(yōu)于BMSCs組，骨折線消失所用時間更短，而對照組骨折區(qū)域以纖維組織為主，直到第4周末也未達到完全愈合。
　　 結(jié)論：
　　 通過以上研究，我們認為頻率為15Hz、強度為1.0mT的電磁場可以促進大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞增值，增高FGF-2和FGFR-2 mRNA的表達；骨髓間充質(zhì)干細胞經(jīng)皮移植可以加快骨折部位骨痂的形成，聯(lián)合應用電磁場刺激進一步增強骨髓間充質(zhì)干細胞促進骨折愈合