1,8-桉葉素抗IBV作用效果及機(jī)制研究.pdf

1、學(xué)位論文學(xué)校代碼：10225學(xué)號(hào)：08062718桉葉素抗IBV作用效果及機(jī)制研究指導(dǎo)教師姓名：申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：論文提交日期：授予學(xué)位單位：口L上天桐姓名祖元?jiǎng)偞T士2008年4月東北林業(yè)大學(xué)東北林業(yè)大學(xué)學(xué)科專業(yè)：植物學(xué)論文答辯日期：2008年6月授予學(xué)位日期：答辯委員會(huì)主席：論文評(píng)閱人：聾多厶櫛素大學(xué)摘要摘要雞傳染性支氣管炎病毒(Infectiousbronchitisvirus，IBV)是巢狀病毒目(Nidovirales)中冠狀病毒科

2、(Coronaviridae)冠狀病毒屬的代表種，它所引起的雞傳染性支氣管炎(Infectiousbronchitis，IB)是一種急性的高度接觸性疾病。由于血清型多、各血清型之間缺乏交叉保護(hù)及遺傳性變異，使IB的防治難度增大，在世界范圍內(nèi)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失，仍是當(dāng)今危害家禽養(yǎng)殖業(yè)最嚴(yán)重的疫病之一。1本文首次研究了1，8桉葉素與IBV的相互作用，結(jié)果表明1，8桉葉素有抑制IBV作用，主要是體外直接滅活作用，在IBV吸附和復(fù)制階段也有一

3、定作用。aTD01，8桉葉素抗IBV作用效果最好，此時(shí)病毒抑制率達(dá)到85360／社231％，且其與IBV體外作用60min時(shí)，存在明顯的直接滅活病毒活性，病毒抑制率可達(dá)到8263％土114％。b在預(yù)處理病毒、復(fù)制、預(yù)處理細(xì)胞及吸附四種作用模式中，1，8桉葉素對(duì)IBV抑制率分別為8263％4132％、6168％211％、12130／社109％及532％士114％。2本文首次初步探討了1，8一桉葉素與IBV的相互作用機(jī)制，結(jié)果表明1，8桉葉

4、素與病毒N蛋白的受體結(jié)合部位有較強(qiáng)作用力，可抑制病毒復(fù)制及組裝；1，8一桉葉素與IBV相互作用可引起預(yù)處理病毒、復(fù)制、吸附及預(yù)處理細(xì)胞模式的細(xì)胞在G1期阻滯；1，8桉葉素對(duì)宿主細(xì)胞有保護(hù)作用；1，8一桉葉素可引起復(fù)制模式細(xì)胞出現(xiàn)凋亡現(xiàn)象，而其預(yù)處理IBV則可明顯減少病毒引起的宿主細(xì)胞凋亡作用。a應(yīng)用分子模擬軟件分析了1，8一桉葉素與IBVN蛋白之間的作用，發(fā)現(xiàn)1，8桉葉素與N蛋白的受體結(jié)合部位有較強(qiáng)作用力，總作用力為3997kcalmo

5、l～，這表明1，8桉葉素對(duì)于病毒復(fù)制及組裝有抑制作用。b通過流式細(xì)胞儀測(cè)定l，8一桉葉素與IBV作用對(duì)宿主細(xì)胞周期的影響，發(fā)現(xiàn)與細(xì)胞對(duì)照Gl期(4123％4121％)相比，預(yù)處理病毒、復(fù)制、預(yù)處理細(xì)胞及吸附四種模式的G1期均有不同程度的增加，其值分別為4749％143％、5011％4211％、5241％115％及5636％4098％；與細(xì)胞對(duì)照S期(3098％067％)相比，預(yù)處理病毒、復(fù)制、預(yù)處理細(xì)胞及吸附模式的S期均有所減少，其值分

6、別為2721％4111％、2456％土123％、2258％4078％及2204％091％；與細(xì)胞對(duì)照G2／M期(27790／硅097％)相比，預(yù)處理病毒、復(fù)制、預(yù)處理細(xì)胞及吸附模式的G2／M期均略有減少，其值分別為25290／硅116％、2534％土099％、2502％土131％及2160％064％。結(jié)果表明1，8一桉葉素對(duì)預(yù)處理病毒及復(fù)制模式的細(xì)胞周期影響很小，而對(duì)吸附及預(yù)處理細(xì)胞模式的周期影響相對(duì)較大，均引起細(xì)胞在Gl期阻滯。C1，