腦膠質(zhì)瘤中NANOG與CD133、GFAP的表達及其相關性的研究.pdf

1、目的：檢測NANOG、CD133、GFAP在體內(nèi)膠質(zhì)瘤組織中的共表達,探討NANOG基因與CD133、GFAP之間的表達關系;培養(yǎng)鑒定U87細胞系中腫瘤干細胞,在體外細胞系水平上探討NANOG與CD133的共表達關系,分析NANOG在膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展中所起到的作用。
　　方法：(1)采用雙重免疫組化法檢測NANOG、CD133、GFAP在60例膠質(zhì)瘤組織中的共表達情況,計算NANOG+細胞、CD133+細胞、GFAP+細胞、NAN

2、OG+/CD133+細胞和NANOG+/GFAP+細胞所占的百分比,并將各陽性指標的表達進行統(tǒng)計學分析。(2)血清剝奪的方法培養(yǎng)U87中膠質(zhì)瘤干細胞,觀察細胞腫瘤球的形成過程;將腫瘤球接種于血清培養(yǎng)基,觀察其在體外的分化特點;免疫熒光鑒定血清剝奪后尚存的細胞、增殖形成的腫瘤球細胞和分化細胞。(3)采用雙重免疫細胞化學染色檢測腫瘤干細胞球中NANOG和CD133的共表達情況,分析兩者之間表達關系。
　　結果：(1)在不同病理級別人腦

3、膠質(zhì)瘤中NANOG+、CD133+和GFAP+細胞百分比差異有顯著性,并且NANOG+表達與CD133+表達呈正相關(r=0.904,P<0.001),NANOG+表達與GFAP+表達呈負相關(r=-0.907,P<0.001)。隨著病理級別的升高,NANOG+/CD133+細胞百分比差異有顯著性(F=560.805,P<0.001),NANOG+/GFAP+細胞(F=0.355,P>0.01)百分比差異沒有統(tǒng)計學意義,并且NANOG+

4、/CD133+表達與CD133+表達呈正相關(r=0.823,P<0.001)。(2)應用血清剝奪的方法成功地篩選出了表達CD133的腫瘤干細胞,并能增殖形成腫瘤球;腫瘤球可多向分化,子代細胞表GFAP和NSE;雙重免疫細胞化學染色發(fā)現(xiàn)NANOG和CD133在腫瘤干細胞球中共表達,在干細胞球周邊呈現(xiàn)半分化狀態(tài)的細胞僅表達CD133而未表達NANOG。
　　結論：(1)在不同級別腦膠質(zhì)瘤中NANOG呈現(xiàn)陽性表達,與腦膠質(zhì)瘤干細胞標記

5、物CD133之間有明顯的相關性,并且腦腫瘤CD133、NANOG陽性細胞的比率和腫瘤的惡性程度有關,有CD133陽性表達的腫瘤組織同時亦表達NANOG,并且存在細胞水平上的共表達。在膠質(zhì)瘤病理分級中,NANOG+表達與GFAP+表達水平呈負相關。高表達NANOG的組織,GFAP的表達水平相對較低,絕大部分的細胞沒有NANOG和GFAP共表達,不同病理級別中NANOG+/GFAP+細胞百分比差異無統(tǒng)計學意義.(2)U87細胞系中存在具有自