擬南芥 AB15 基因啟動子的克隆與遺傳轉化載體構建.pdf

1、植物啟動子序列含有多種順勢作用元件，能在轉錄水平上參與調控下游基因相應基因的表達過程，從而使植物能對外界環(huán)境做出響應的調節(jié)，分析植物某一基因的啟動子，能為其下游基因激活表達的機理提供相應的實驗依據(jù)。脫落酸(abscisic acid，ABA)是植物體內一種重要的激素，它不僅參與植物體內多種生理過程，而且能調控植物細胞內的新陳代謝，以此來調節(jié)植物適應環(huán)境。ABI5(ABA insensitive5)是一個在種子和營養(yǎng)器官中響應ABA信號的

2、亮氨酸拉鏈蛋白。它能激活一系列受ABA調控的基因的表達，在ABA信號傳遞、相關基因表達以及胚胎發(fā)育等方面起著重要的作用，以此來調節(jié)植物生長發(fā)育以及適應各種變化的環(huán)境。
　　由于擬南芥全基因組已經(jīng)測序完成，本論文直接從NCBI基因數(shù)據(jù)庫中獲得擬南芥ABI5啟動子序列。通過對該段啟動子序列進行生物信息學分析，發(fā)現(xiàn)該段序列中含有大量可能與根和花定位相關的序列以及大量響應ABA信號、應答干旱、鹽堿和光信號的順勢作用元件，這些可能的序列會對

3、ABI5基因的表達起到相應的調控作用。而且在轉錄起始位點之前的不翻譯區(qū)有一段782bp的內含子序列，可能會對啟動子的轉錄活性造成影響。為了全面了解該啟動子序列調控下游基因表達的時空特異性，我們設計了一對能特異擴增出包含整個ABI5基因啟動子區(qū)以及不翻譯區(qū)（包括內含子）的引物，然后通過常規(guī)PCR擴增得到了ABI5轉錄起始位點(ATG)之前的1820bp片段，并進行測序檢驗。隨后將這段序列與經(jīng)過雙酶切的pCAMBIA1031質粒構建成ABI