尼妥珠單抗包被的四氧化三鐵納米顆粒對肺癌細胞放射增敏及磁共振顯像的研究.pdf

1、目的：尼妥珠單抗(Nimotuzumab，hR3)是表皮生長因子單克隆抗體，對多種實體瘤細胞具有明顯的放療增敏作用，四氧化三鐵納米粒子有良好的磁共振信號敏感性，本研究探討尼妥珠單抗包被的四氧化三鐵納米顆粒(hR3-SPIO)對肺癌A549細胞的放射增敏作用和對肺癌細胞體外磁共振成像的影響。
　　 方法：1、將呈對數(shù)生長期肺癌A549細胞接種于96孔板，設(shè)空白對照組及hR3-SPIO組，其中后者設(shè)12.5、25、50、100、20

2、0ug/ml共五個濃度梯度，應(yīng)用MTT法檢測各組細胞增殖情況；2、將細胞接種于24孔板中，分為照射組、hR3-SPIO+照射組，其中hR3-SPIO+照射組于藥物處理后12h、24h、48h分別給予0、1、2、4、6、8、10Gy照射，集落形成法檢測細胞增殖和細胞存活率；用單擊多靶模型擬合劑量存活曲線；求出輻射增敏比(SER)，評價增敏效果；3、將呈對數(shù)生長的腫瘤細胞接種于6孔培養(yǎng)板，設(shè)空白對照組、照射組、hR3-SPIO組，hR3-S

3、PIO+照射組，應(yīng)用流式細胞儀檢測各組細胞周期分布情況；4、將呈對數(shù)生長的腫瘤細胞接種于六孔板的細胞，設(shè)置空白對照組，照射組，hR3-SPIO組，hR3-SPIO(培養(yǎng)12h)+照射組，hR3-SPIO(培養(yǎng)24h)+照射組，hR3-SPIO(培養(yǎng)48h)+照射組，應(yīng)用WesternBlot法檢測凋亡相關(guān)蛋白bcl-2、bax、caspase-3的表達情況；5、將hR3-SPIO、hR3、SPIO分別與A549細胞孵育，同時設(shè)立對照組，

4、體外磁共振成像(MRI)觀察各組T2弛豫時間。
　　 結(jié)果：1、不同濃度的hR3-SPIO在12.5-200ug/ml濃度范圍內(nèi)，隨著濃度逐漸增大，腫瘤細胞的OD值逐漸下降，與空白對照組相比具有統(tǒng)計學差異(p<0.05)，腫瘤細胞生長的抑制率逐漸增加，hR3-SPIO復(fù)合物對肺癌A549細胞株具有抑制增殖的作用，呈明顯量-效關(guān)系；2、hR3-SPIO對肺癌A549細胞有放射增敏作用，25ug/mlhR3-SPIO培養(yǎng)48h的放射

5、增敏比(SER)為1.28；3、hR3-SPIO與放療聯(lián)合作用下細胞G2/M期比例升高至56.74±0.05％，與照射組比較，具有統(tǒng)計學差異(P<0.05)；4、Western blot分析表明用藥后凋亡抑制蛋白bcl-2表達降低，凋亡促進蛋白bax及calspase-3表達增加；5、體外MRI顯示hR3-SPIO組T2弛豫時間低于其它三組(P<0.05)。
　　 結(jié)論：hR3-SPIO對肺癌A549細胞有毒性作用和有放射增敏性