維生素C對新生大鼠心肌細(xì)胞缺氧復(fù)氧的保護(hù)作用.pdf_第1頁
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1、山東大學(xué)碩士學(xué)位論文維生素C對新生大鼠心肌細(xì)胞缺氧復(fù)氧的保護(hù)作用姓名:張兆華申請學(xué)位級別:碩士專業(yè):兒科學(xué)指導(dǎo)教師:郝芳之20040501』J爾人學(xué)碩Ij、浮似論文中文摘要目的:奉研究R在通過刈新f卜人敝心肌細(xì)胞的原代培養(yǎng)及缺氧/復(fù)氧(hypoxia/reoxygcnation,H/R)壩傷幔,詛的構(gòu)建,探討維生素C(vitaminC,VitC)對缺敏復(fù)氧心肌糾JJ(!』的保護(hù)1:川殷j上機(jī):|jII。方法:1、刈新生人鼠心zi兒兒I勻

2、JIIo一I%膚籃t’I慨進(jìn)行『lj化,用差速貼壁法純化心肌細(xì)胞,用DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng),侮隔48小時換液。于倒置顯微鏡下觀察,剛臺盼藍(lán)染色法評價心n兒細(xì)胞質(zhì)髓。2、建立心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷梭掣。墩生長72小時的單層心肌細(xì)胞,換用N2飽和的低軸DMEM培養(yǎng)基,培養(yǎng)瓶內(nèi)充入95%N25%C02(1L/rain)持續(xù)90秒,以驅(qū)除艦內(nèi)釩氣,37℃密閉培養(yǎng)2小時,造成心肌細(xì)』弛缺氰損傷=;!掣。瓜換川飽含瓴7i的商檐DMEM培養(yǎng)基,培養(yǎng)瓶內(nèi)立

3、即允入95%O25%C02(1L/nlill)持續(xù)90秒,以驅(qū)除瓶內(nèi)N2,37℃密閉培養(yǎng)l小時,建立心肌自II胞缺釩擬傷模掣。3、將培養(yǎng)的心肌細(xì)胞隨機(jī)分成I;IJi紕:缺氧/復(fù)氧損傷組(H/R組)和VitC(50ug/m1)保護(hù)組(VitCftl)檢測兩組培養(yǎng)基內(nèi)乳酸脫氫酶(LDH)濃度州心肌細(xì)J也l^J鈣離J‘、內(nèi)j瞵(MDA)濃度。結(jié)果:1、心肌絀胞純度為955%,成灑二i為9503%。米貼壁前心肌細(xì)胞為圓形或橢嘲ff;。411后J

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