小分子化合物對CaCCs的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、　　鈣激活氯通道(CaCCs)廣泛的分布于脊椎和非脊椎動物的各種組織中，因其可以被細胞內(nèi)部鈣離子所激活而得名，所介導(dǎo)的電流稱為鈣激活氯電流。CaCCs參與了多種生理過程，包括跨上皮細胞分泌、神經(jīng)元興奮、平滑肌收縮和爪蟾卵母細胞受精過程等。2008 年末，相繼有三個實驗室發(fā)現(xiàn) TMEM16A(亦稱 ANO1)是 CaCCs的分子基礎(chǔ)，這使得進一步研究CaCCs在生理學(xué)、藥理學(xué)和病理學(xué)方面的作用機制成為可能。
　　目前對CaCCs

2、研究主要的困難在于缺乏對CaCCs/TMEM16A顯示特異性調(diào)節(jié)作用的物質(zhì)，特別是小分子物質(zhì)。另一方面， CaCCs 通道功能異常會誘發(fā)多種疾病，如：囊性纖維化、干燥綜合癥、胃腸功能紊亂、高血壓、哮喘和某些癌癥，而治愈或緩解這些癥狀就需要特異性的開放劑或抑制劑，所以CaCCs/TMEM16A也已經(jīng)成為治療上述疾病潛在的藥物靶點。本論文旨在采用膜片鉗和激光共聚焦熒光顯微成像技術(shù)篩選特異性作用于CaCCs/TMEM16A通道的天然小分子化合

3、物，主要研究內(nèi)容如下：
　　(1)在本研究組前期工作的基礎(chǔ)上，本文采用膜片鉗全細胞、內(nèi)面向外兩種模式和熒光顯微成像技術(shù)，深入系統(tǒng)的研究了殼寡糖對于TMEM16A離子通道的激活作用，并比較殼寡糖個單體(DP2-DP6)對通道激活作用的差異。實驗結(jié)果確認了殼寡糖對通道活性的激活作用，并初步探索了該激活作用的作用機制。
　　(2)首次利用殼寡糖作為 TMEM16A 通道開放劑，對高通量藥物篩選的實驗方法加以改進，減小了多次

4、轉(zhuǎn)染對細胞造成的傷害，簡化了實驗流程，并使之適用于激光共聚焦顯微鏡實驗，并與文獻報道的實驗現(xiàn)象進行對比。實驗結(jié)果確認了本論文對于實驗方法改進的合理性和可行性。
　　(3)首次利用改進的篩選方法對本文初步確定的幾種中藥小分子化合物進行篩選，包括柴胡皂苷 d、肉桂酸、葛根素、甜菜堿、甘草次酸。篩選實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)其中的甜菜堿對TMEM16A通道有抑制作用，進一步的膜片鉗實驗結(jié)果表明，甜菜堿是通過穩(wěn)定TMEM16A關(guān)閉構(gòu)象抑制其活性的。