煙草煙霧吸入對大鼠腦組織E-selectin和TNF-α的影響.pdf

1、中國醫(yī)科大學碩士學位論文煙草煙霧吸入對大鼠腦組織Ein和TNFα的影響姓名：劉淑杰申請學位級別：碩士專業(yè)：神經(jīng)病學指導教師：柳忠蘭2002.4.1／材料和方法＼＼1實驗材料：健康wistar大鼠60只，由中國醫(yī)科大學實驗動物中心提供，實驗用煙為市售某牌香煙，自制8060x58em3的煙箱，E—selectin、TNF—a單克隆抗體及SABC試劑盒均購自武漢博士德生物工程有限公司。2實驗方法：健康w／star大鼠60只，隨機分成六組：A組

2、：正常對照組；B組：非吸煙對照組；C組：短期吸煙組；D組：長期小量吸煙組；E組：長期大量吸煙組；F組：戒煙組。長期大量組、短期吸煙組、戒煙組每次吸煙lO支，長期小量吸煙組每次吸煙4支，每組每天吸煙兩次，每次30分鐘，兩次間隔4小時。長期組吸煙三個月，短期組吸煙一個月，戒煙組吸煙一個月，戒煙一個月。各組實驗動物在各時間點，經(jīng)10％水合氯醛麻醉，以150毫升肝素化生理鹽水和4％多聚甲醛250ml進行灌流固定，將固定后的標本，常規(guī)進行水洗，材

3、料脫水、浸蠟、包埋，在石蠟切片機上切取冠狀腦片，連續(xù)切片lO張，厚度約5pm，分別行HE染色，E—selectin及TNF—d免疫組化染色。免疫組化染色采用SABC法，DAB顯色，光學顯傲鏡下觀察各組免疫組化切片陽性反應(yīng)物沉積情況，在切片由皮質(zhì)處觀測5個不重復高倍視野，分別計數(shù)E—selectin各組陽性血管內(nèi)皮細胞數(shù)及TNF一儀陽性細胞數(shù)，實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)4標準差表示，用SPSS統(tǒng)計軟件進行方差分析，應(yīng)用q檢驗，做組間兩兩分析比較，P0