未成熟樹突狀細胞誘導大鼠小腸移植免疫耐受的實驗研究.pdf

1、目的:一、通過改進外科技術,探討建立一種穩(wěn)定和實用的大鼠異位全小腸移植(SBT)模型方法:三袖套血管吻合法二、參照樹突狀細胞(DC)經(jīng)典分離誘導方案,從大鼠骨髓分離DC及前體,培養(yǎng)擴增未成熟樹突狀細胞(imDC).三、用培養(yǎng)擴增的供者imDC預處理受者,復制大鼠SBT模型,術后觀察受者一般情況及移植腸存活時間,檢測移植術后移植腸的排斥反應分級.方法:實驗分三部分.一、SBT部分:將60只Wistar大鼠作為受體隨機分為實驗組(30只)和

2、對照組(30只),另取60只Wistar大鼠作供體,行Wistar大鼠同系小腸移植.實驗組受體鼠給予三袖套血管吻合法,對照組受體鼠給予經(jīng)典血管吻合法,比較兩組手術結果.二、imDC培養(yǎng)部分:采用直接分離誘生法:在經(jīng)典分離誘導方案(GM-CSF+IL-4)的基礎上,培養(yǎng)第5天分成兩組:IL-4組和IL-10組.IL-4組繼續(xù)用經(jīng)典方案培養(yǎng),IL-10組加入IL-10抑制大鼠骨髓來源DC的成熟,制備imDC,光鏡觀察DC形態(tài),用FCM檢測所

3、得DC表型.直接分離誘生法:低滲裂解紅細胞,特異T、B細胞單抗、補體依賴的細胞毒性作用破壞T、B淋巴細胞、巨噬細胞、血小板等其它雜項細胞,最后陰性選擇留下DC及前體細胞,再利用DC的弱粘附性,將DC及前體從血液或骨髓液中分離出來,然后加入細胞因子培養(yǎng)擴增.三、imDC干預SBT部分:將24只SD大鼠作為受體隨機分為空白對照組、CsA組、imDC組、CsA+imDC組,每組6只,另取24只Wistar大鼠作供體.空白對照組只行SBT,不作

4、干預(預處理);imDC組用培養(yǎng)的Wistar大鼠的imDC預處理SD大鼠,CsA組用CsA預處理SD大鼠,imDC+CsA組用CsA預處理SD大鼠,行同種異體SBT移植,術后觀察受體鼠一般情況及移植腸存活時間,術后第3、5、7天分別取移植小腸粘膜行組織病理檢查.結論:一、三袖套法血管吻合法行大鼠異位SBT操作簡便、并發(fā)癥少,受體動靜脈吻合時間、移植腸溫缺血時間及受體手術時間明顯縮短,是一種良好的研究SBT的實驗模型.二、直接分離誘生法