胃腺癌細(xì)胞中E-cadherin表達(dá)調(diào)控機(jī)制的研究.pdf

1、目的:研究上皮鈣黏附蛋白(E-cadherin)在正常的胃粘膜上皮細(xì)胞、正常的支氣管粘膜上皮細(xì)胞、胃腺癌細(xì)胞和肺腺癌細(xì)胞中的表達(dá)情況及其差異，并探討此種差異的內(nèi)在機(jī)制。
　　方法:第一部分是選取正常的胃粘膜上皮細(xì)胞（GES-1細(xì)胞）、正常的支氣管粘膜上皮細(xì)胞（HBE細(xì)胞）、胃腺癌細(xì)胞（SGC-7901、MGC-803和BGC-823細(xì)胞）和肺腺癌細(xì)胞(A549細(xì)胞)作為研究對(duì)象，提取各細(xì)胞株總RNA采用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)E-ca

2、dherin在mRNA水平的表達(dá)情況;提取各細(xì)胞株總蛋白采用免疫印跡(WesternBlot)技術(shù)檢測(cè)E-cadherin在蛋白水平的表達(dá)情況。第二部分是抽提各細(xì)胞株DNA，采用MSP（甲基化特異性PCR）和BSP(亞硫酸氫鹽修飾后測(cè)序PCR)來(lái)檢測(cè)各細(xì)胞株E-cadherin基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島的甲基化水平。第三部分是使用轉(zhuǎn)甲基酶抑制劑5-氮雜胞苷（5-Azacytidine）作用于各細(xì)胞株72h后應(yīng)用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)各細(xì)胞株中E

3、-cadherin表達(dá)水平的變化以進(jìn)一步探究E-cadherin表達(dá)與甲基化之間的關(guān)系。
　　結(jié)果:1.E-cadherin僅在HBE細(xì)胞中表達(dá)，在其余各細(xì)胞中不表達(dá)。2.MSP和BSP顯示四種腫瘤細(xì)胞的E-cadherin基因啟動(dòng)子區(qū)的CpG島均存在高甲基化，而GES-1和HBE兩種正常的上皮粘膜細(xì)胞中則幾乎不存在甲基化。3轉(zhuǎn)甲基酶抑制劑5-氮雜胞苷(5-Azacytidine)能夠使各腫瘤細(xì)胞株中E-cadherin在mRNA

4、水平上恢復(fù)表達(dá)，但不能使GES-1細(xì)胞中E-cadherin恢復(fù)表達(dá)，亦不能使HBE細(xì)胞中E-cadherin表達(dá)增加。
　　結(jié)論:E-cadherin的表達(dá)水平與E-cadherin基因啟動(dòng)子區(qū)的甲基化水平都存在密切的關(guān)系。四種腫瘤細(xì)胞中E-cadherin的缺失可能與其基因啟動(dòng)子區(qū)的高甲基化有關(guān)。而GES-1細(xì)胞中E-cadherin的缺失則與甲基化無(wú)關(guān)，缺失的原因需要進(jìn)一步研究。亞硫酸氫鹽修飾后PCR(BSP)聯(lián)合TA克隆測(cè)