膿毒癥脾細胞損傷機制的探討及丹參保護作用的實驗研究.pdf

1、目的：復制膿毒癥大鼠模型，動態(tài)觀察膿毒癥對脾組織細胞的影響；觀察腫瘤壞死因子(TNF-a)和氧自由基(OFR)含量的變化對脾細胞凋亡的影響，以探討膿毒癥脾細胞凋亡的機制；觀察中藥丹參對此過程的干預作用，以期為膿毒癥的臨床治療提供實驗依據。 方法：選用體重180-250g的雄性Wistar大鼠96只，隨機分為對照組(control group，Control)、假手術組(sham operated group，Sham)、模型組(

2、cecal ligation and puncture group，CLP)和丹參干預組(Salvia miltiorrhizatreated group，Salvia)，每組24只。每組又分6h、12h、24h和48h四個時間點，每時間點6只。Control組動物僅給3﹪戊巴比妥鈉30mg/kg腹腔麻醉；Shma組僅行盲腸翻動，不行結扎和穿刺；CLP組行盲腸結扎后用20號針貫穿盲腸3次制成膿毒癥模型；Salvia組于行CLP后腹腔注射

3、丹參注射液10g(1.0g/ml)。每組動物均于相應時間點麻醉活殺，腹主動脈取血，用于檢測血清中TNF-a、MDA水平變化及GXH-Px活力測定。同時取其脾臟，分別用于脾組織勻漿的制備和病理組織學檢查。采用雙抗夾心ABC-ELISA法測定TNF-a，采用硫代巴比妥酸法測定MDA、采用DTNB直接法測定GSH-Px、采用終末脫氧核糖核酸轉移酶介導的原位缺口末端標記(terminal deoxynucleotidyl transferase

4、-mediateddUTP nick end labeling，TUNEL)技術檢測脾細胞凋亡情況。采用多元性回歸分析篩選影響脾細胞凋亡的因素。 結果：(1)膿毒癥模型的確認：CLP組腹腔炎癥的嚴重程度與時間呈依賴關系，腹腔炎癥在48h達到高峰，腹腔內有大量膿性或血性滲出液，而Control組與Sham組腹腔無明顯的炎癥過程。 (2)血清和脾組織TNF-a的變化與Control組相比，Sham組TNF-a水平在各時間點均

5、增高(p<0.01)，并且在12時間點達到峰值，其后逐漸下降。CLP組與Sham組相比，血清TNF-a水平在6h升高，于24h達到峰值。Salvia組也在6h升高，但峰值滯后于CLP組，于48h達到其峰值，并在24h顯著低于CLP組(p<0.01)。 (3)血清和脾組織MDA的變化 Control 組和Sham組MDA水平未見明顯差異，與Sham組相比，CLP組在6h時間點明顯增高，于48h達到峰值。Salvia組血清MDA增高

6、滯后于CLP組，在12h后開始增高，在48h達到峰值，并在12h和24h分別顯著低于同時間點CLP組(p<0.01)。 (4)血清脾組織GSH-Px的變化Control組和Sham組血清GSH-Px未見明顯變化，與Sham組相比，CLP組在6h降低，48h達到最低值。Salvia組GSH-Px降低滯后于CLP組，在12h后降低，也在48h達其最低值，水平接近于CLP組。Salvia組血清GSH-Px在6h、12h和24h三個時間

7、點顯著高于CLP組，(p<0.01)。 (5)脾細胞凋亡的變化CLP組在6h時間點陽性率增加，在24h達到高峰，在48h時間點陽性率減少。Salvia組在6h陽性率開始增高，24h達到高峰，但其陽性率在12h和24h低于同時間點CLP組(P<0.01)。 (6)多元性回歸分析結果：影響膿毒癥大鼠脾細胞的凋亡的因素是血清MDA,脾組織MDA，脾組織TNF-a和脾組織GSH-Px。 結論：1．予Wistar大鼠施盲腸