胃癌細胞系SGC-7901腫瘤干細胞的初步研究.pdf

1、福建醫(yī)科大學碩士學位論文胃癌細胞系SGC7901腫瘤干細胞的初步研究姓名：許揚梅申請學位級別：碩士專業(yè)：病理學與病理生理學（病理學）指導教師：鄭天榮鄭秋紅20080301胃癌細胞系SGC7901腫瘤干細胞的初步研究摘要目的：胃癌是我國癌癥中的頭號殺手，是對人類健康危害極大的惡性腫瘤。目前的研究顯示胃癌可能來源于干細胞。但胃癌干細胞的研究尚處于探索階段。本實驗包含兩個方面的內(nèi)容：(1)證明胃癌細胞系SGC7901中存在腫瘤干細胞的等級結構

2、。(2)建立一種培養(yǎng)胃癌干細胞的方法，并進行干細胞特性鑒定。方法：(1)本實驗通過有限稀釋法，分離單個細胞并觀查其增殖情況，以證明在胃癌細胞系SGC7901中存在腫瘤干細胞的等級結構。(2)應用添加有EGF、FGF和Insulin等生長因子的無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)SGC一7901細胞，得到懸浮生長的細胞球。(3)利用有限稀釋法、軟瓊脂克隆形成實驗、NOD／SCID鼠體內(nèi)異位移植成瘤實驗、基因芯片技術、實時熒光定量PCR和流式細胞術等實驗方法檢

3、測細胞球細胞的特性，并與貼壁生長的細胞相比較。結果：(1)運用有限稀釋法，發(fā)現(xiàn)有血清培養(yǎng)基培養(yǎng)的單個SGC一7901細胞中，只有一小部分細胞能夠存活、增殖，并最終形成能夠穩(wěn)定傳代的細胞系；在無血清培養(yǎng)基中，也只有少量SGC7901細胞能夠懸浮生長并增殖成細胞球，細胞球細胞可多次傳代，而且懸浮細胞的球形成能力大約是貼壁細胞的3倍。(2)軟瓊脂克隆形成能力實驗中懸浮細胞組比貼壁細胞組形成更多更大的克隆集落。NOD／SCIDd、鼠成瘤實驗顯示

4、，懸浮細胞在約86671155％的小鼠身上都能形成腫瘤，而貼壁細胞組成瘤率較低，只有13331155％左右?；蛐酒Y果顯示，腫瘤球細胞高表達與干細胞相關的基因ABCG2、HESl和KRTl53。用實時熒光定量PCR方法檢測這三個基因以及CD44的表達情況，其結果與基因芯片結果基本一致。用流式細胞儀檢測細胞表面ABCG2和CD44的表達情況，其結果同基因芯片和熒光定量PCR結果一致。結論：本實驗不僅證明了胃癌細胞系SGC一7901中腫瘤