BDNF基因修飾的人骨髓間充質(zhì)干細胞移植治療帕金森病的實驗研究.pdf

1、該實驗對人骨髓MSCs進行了分離，純化和擴增，并在體外利用重組逆轉(zhuǎn)錄病毒載體將人BDNF基因轉(zhuǎn)入人骨髓MSCs，獲得了100％的BDNF表達，成功構(gòu)建了BDNF-MSCs有限細胞系。免疫細胞化學檢測發(fā)現(xiàn)，培養(yǎng)基中BDNF的含量是正常細胞的20000倍，染色體分析未見異常。然后將BDNF-MSCs移植入帕金森模型大鼠的大腦黑質(zhì)紋狀體內(nèi)，并檢測移植細胞的存活，遷移，分化以及大鼠的行為改變，以期為干細胞最終用于臨床獲得理論依據(jù)和技術(shù)資料。結(jié)果

2、顯示移植細胞能在受體大鼠腦內(nèi)存活達90天，部分呈血管內(nèi)皮細胞樣，并沿血管周圍分布。免疫組織化學染色顯示，移植細胞表達NENSE和GFAP等神經(jīng)元及神經(jīng)膠質(zhì)細胞標志，提示移植細胞向神經(jīng)細胞分化的趨勢。移植大鼠行為學檢測顯示，移植BDNF-MSCs的模型大鼠行為改善優(yōu)于移植MSCs的大鼠。以上結(jié)果提示，BDNF基因修飾的人骨髓間充質(zhì)干細胞能夠在PD模型大鼠腦內(nèi)發(fā)揮積極作用，有望成為治療帕金森病的種子細胞。 結(jié)論： 1.建立了

3、一種富集、純化人類MSCs的方法，該方法操作簡單，容易形成標準化，建立了對人類MSCs進行科學評估的技術(shù)平臺。 2.通過流式細胞術(shù)分析MSCs的表型，鑒定純度，而定向誘導(dǎo)實驗可確定MSCs的分化潛能。綜合上述幾項技術(shù)即可部分評價MSCs的生物學性狀。 3.通過逆轉(zhuǎn)錄病毒載體將人類BDNF基因轉(zhuǎn)導(dǎo)MSCs，建立了BDNF-MSCs有限細胞系，為再生醫(yī)學提供了一種具有多重作用的種子細胞，同時為基因治療提供了一種以多潛能成體干