辛伐他汀對(duì)豚鼠哮喘模型氣道炎癥和重塑的影響及機(jī)制.pdf

1、目的:本研究通過(guò)檢測(cè)豚鼠哮喘模型血清中IL-4、TGF-β1水平和肺組織Rock2蛋白的表達(dá)探討:1、辛伐他汀對(duì)哮喘氣道炎癥及重塑的影響，為哮喘的臨床防治提供新的治療途徑。2、辛伐他汀干預(yù)哮喘氣道炎癥及重塑的可能機(jī)制。
　　 方法:本實(shí)驗(yàn)將50只健康雄性豚鼠（6周齡，體重250-300克）通過(guò)隨機(jī)數(shù)字表法將豚鼠分為5組，分別為:對(duì)照組、哮喘模型組、S1:20mg/kg辛伐他汀干預(yù)組、S2:40mg/kg辛伐他汀干預(yù)組、S3:60

2、mg/kg辛伐他汀干預(yù)組，每組10只。本實(shí)驗(yàn)以O(shè)VA致敏和反復(fù)激發(fā)復(fù)制豚鼠哮喘模型。哮喘組和辛伐他汀干預(yù)組均用OVA致敏和激發(fā)，而正常對(duì)照組豚鼠致敏和激發(fā)均使用等量生理鹽水代替OVA進(jìn)行，余操作同哮喘組。三個(gè)辛伐他汀干預(yù)組除正常致敏激發(fā)外，每次于激發(fā)前30分鐘分別給予辛伐他汀20mg/kg、40mg/kg、60mg/kg混懸液腹腔注射。末次激發(fā)24小時(shí)后，股動(dòng)脈放血處死，然后收集血清、肺泡灌洗液(BALF)及肺組織，分別計(jì)算炎性細(xì)胞總數(shù)

3、、嗜酸性粒細(xì)胞總數(shù)，部分肺組織行病理切片、蘇木精-伊紅(HE)染色;用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)血清中IL-4、TGF-β的水平;免疫組織化學(xué)法檢測(cè)各組豚鼠肺組織中Rock2蛋白的表達(dá)，并進(jìn)行定量分析。
　　 結(jié)果:
　　 1、成功建立豚鼠哮喘模型。
　　 2、各組豚鼠BALF中細(xì)胞總數(shù)和EOS計(jì)數(shù)(×104/ml):哮喘組細(xì)胞總數(shù)、EOS計(jì)數(shù)(401.8±110.7，61.9±12.5)、S1(273.6

4、±33.1,27.8±9.1)、S2(207.9±35.8,18.4±7.3)、S3(199.3±28.6,28.6±10.7)均高于正常對(duì)照組(101.1±16.6，4.9±1.6)(P＜0.01，P＜0.01)，辛伐他汀干預(yù)組細(xì)胞總數(shù)及嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)均明顯低于哮喘模型組(P＜0.05)，但高于正常對(duì)照組(P＜0.05)。
　　 3、病理切片結(jié)果:正常對(duì)照組肺組織結(jié)構(gòu)正常完整，管腔規(guī)則無(wú)狹窄，氣道黏膜無(wú)水腫，周?chē)鸁o(wú)炎癥細(xì)胞浸

5、潤(rùn)，肺泡間隔完整正常。哮喘模型組可見(jiàn)大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，支氣管平滑肌增生肥厚，管壁增厚，管腔狹窄，肺泡間隔不均勻增厚。辛伐他汀干預(yù)組支氣管肺組織病理改變明顯輕于哮喘模型組。
　　 4、血清ELISA法檢測(cè)IL-4、TGF-β1結(jié)果:與正常組（18.52±3.70，22.79±6.56）相比，哮喘模型組IL-4、TGF-β1水平(38.23±6.33，47.61±8.08)、S1組(28.62±5.58，38.96±6.38)、S2

6、組(23.69±4.08,30.46±8.61)、S3組(30.49±6.86,40.10±7.05)明顯增加(P＜0.01)。其中，哮喘模型組明顯高于辛伐他汀干預(yù)組(P＜0.05);S1、S3組高于S2組(P＜0.05)。
　　 5、免疫組織化學(xué)法測(cè)豚鼠氣道Rock2蛋白的表達(dá)，以陽(yáng)性表達(dá)的平均光密度值為統(tǒng)計(jì)量:與正常對(duì)照組(0.078±0.011)相比，哮喘模型組(0.153±0.014)、S1組(0.121±0.017)、

7、S2組(0.097±0.021)、S3組(0.125±0.032)明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);哮喘模型組高于3個(gè)辛伐他汀干預(yù)組(P＜0.05)，S2組低于S1、S3組(P＜0.05)。
　　 6、直線相關(guān)性分析結(jié)果:肺組織Rock2蛋白的表達(dá)與血清中IL-4、TGF-β1水平均呈顯著正相關(guān)(r=0.533，P＜0.05;r=0.622，P＜0.01)。IL-4與TGF-β1水平呈正相關(guān)(r=0.625，P＜0.0

8、5)。
　　 結(jié)論:
　　 1、通過(guò)抗原致敏和反復(fù)霧化激發(fā)，可成功建立具有氣道炎癥和氣道重塑特征的豚鼠哮喘模型。
　　 2、辛伐他汀可降低IL-4水平，調(diào)節(jié)Th1/Th2失衡，減輕氣道炎癥。辛伐他汀可降低TGF-β1水平，發(fā)揮抑制氣道重塑的作用。
　　 3、哮喘模型組豚鼠氣道中Rock2蛋白表達(dá)明顯高于對(duì)照組，提示哮喘可能與Rho/Rock信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的激活有關(guān)。辛伐他汀干預(yù)組氣道中Rock2蛋白表達(dá)均低