人白細胞介素6基因啟動子報告載體的構(gòu)建及作用檢測.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本文對人白細胞介素6基因啟動子報告載體的構(gòu)建及作用進行了探討。文章以雌激素對IL-6基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用為切人點，構(gòu)建了人IL-6基因啟動子報告載體，并與人雌激素受體表達載體共轉(zhuǎn)染小鼠成骨樣細胞，檢測了雌激素作用和IL-1誘導(dǎo)對這一報告載體轉(zhuǎn)錄活性的影響。研究表明，人IL-6基因啟動子分析人IL-6基因的翻譯起始點位于轉(zhuǎn)錄起始點下游第63個堿基處，其啟動子區(qū)域存在CREB、C/EBP和NF-κB等重要的反應(yīng)元件；人IL-6基因啟動子螢光素酶

2、報告載體的構(gòu)建PCR擴增了人IL-6基因啟動子，產(chǎn)物長度為222bp(-176～+46)。通過T-A克隆和亞克隆依次構(gòu)建了人IL-6基因啟動子的克隆載體(pMD18sim-hIL6)和螢光素酶報告載體(pGL3-hIL6)；雌激素處理抑制IL-1β誘導(dǎo)下pGL3-hIL6報告載體的轉(zhuǎn)錄活性在共轉(zhuǎn)染HEO的MC3T3-E1細胞中，IL-1β(5ng/ml)處理使pGL3-hIL6大量表達，而加入不同濃度的17β-E2(10-6、10-8和

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