腫瘤相關抗原SC的分離純化及其特性分析.pdf

1、目的：惡性腫瘤是對人類身體健康威脅最大，且死亡率最高的疾病之一。目前，傳統的手術、放療和化療等方法的療效均不理想。其原因主要是因為對惡性腫瘤的發(fā)生、轉移和免疫逃避等機制的研究仍不十分清楚。近年來，隨著分子生物學理論和技術的發(fā)展，大量實驗表明，對腫瘤相關抗原(tumorassociatedantigen，TAA)的研究，是解決上述問題的途徑之一。這不但對于腫瘤的基礎研究意義重大，同時也是癌癥早期免疫診斷和主動免疫治療的先決條件。20世紀8

2、0年代以來，隨著CTL篩選法和重組cDNA表達文庫血清分析法等腫瘤抗原鑒定方法的逐步發(fā)展和完善，大量具有臨床應用價值的腫瘤排斥抗原被陸續(xù)發(fā)現，極大地促進了這一領域的研究進展。 SC抗原(SCAg)作為新近研究的一組TAA，在胰腺、大腸、小腸、胃和乳腺等上皮性腫瘤組織中呈高表達，而在正常組織中無表達。這不僅是研制新型腫瘤疫苗的理想抗原，而且對上皮性腫瘤的病因學、病理學和免疫學等基礎研究具有十分重要的意義。本研究通過免疫沉淀等技術，

3、對單克隆抗體(monoclonalantibody，MAb)SC11和SC12識別的相應抗原，即SCAg11和SCAg12進行分離、純化，并對其基本特性進行分析。旨在為其進一步的研究和新型腫瘤疫苗的制備等奠定理論和物質基礎。 方法：腹水單克隆抗體用10～12周齡雌性BALB/c小鼠制備，其雜交瘤細胞為本實驗室研制。腫瘤及正常組織標本取自我院普通外科大腸癌病人手術切除組織。免疫沉淀試劑盒為美國Perice公司產品。 BAL

4、B/c小鼠腹腔注射降植烷0.5m1后常規(guī)飼養(yǎng)備用。復蘇液氮中凍存的雜交瘤細胞，常規(guī)培養(yǎng)和傳代。收獲細胞懸液以5×105～5×106個細胞/只小鼠，注入預處理10天以上的BALB/c小鼠腹腔。待其生成大量腹水后，抽取腹水離心取上清，-20℃凍存?zhèn)溆谩Ｓ媒浢庖呓M織化學染色與抗SCAg單克隆抗體反應呈陽性的癌組織，經勻漿、離心和透析制備成粗提抗原，然后通過免疫沉淀進行分離、純化。最后以SDS-PAGE、Westernblot和ELISA等方法

5、對所獲抗原進行鑒定。結果：免疫組織化學染色顯示，SCAg11及SCAg12蛋白在結腸癌細胞中呈強表達，主要位于細胞膜及細胞質中。經純化的SCAg11和SCAg12，通過SDS-PAGE均顯示一條帶，其分子量分別約為65.8kD和67.4kD。Westernblot與其相應抗SCAg單克隆抗體反應呈陽性，而甲胎蛋白(alpha-fetoprotein，AFP)、人血清白蛋白(humanserumalbumin，HSA)、癌胚抗原(arci

6、no-embryonicantigen，CEA)、SCAg6以及正常組織抗原對照均為陰性，且在SCAg11及SCAg12之間無交叉反應。ELISA檢測結果與Westernblot完全相同。 結論：本研究通過免疫沉淀等技術，成功地獲取了SCAg11及SCAg12高純度的腫瘤相關抗原純品。SDS-PAGE顯示，SCAg11和SCAg12的分子量分別約為65.8kD和67.4kD。SCAg11及SCAg12抗原之間，以及二者與AFP、