腎臟缺血再灌注中足細(xì)胞損傷機(jī)制的研究.pdf

1、目的: 通過(guò)觀察腎臟缺血再灌注中血管緊張素II(AngII)、足細(xì)胞形態(tài)學(xué)及其相關(guān)蛋白分子nephrin、podocin表達(dá)變化，探討AngII在腎臟缺血再灌注足細(xì)胞損傷中的作用及其可能機(jī)制，為其預(yù)防和治療提供新的靶點(diǎn)。 方法： (1)取健康雄性SD大鼠，通過(guò)夾閉雙側(cè)腎動(dòng)脈制作腎臟缺血模型，60分鐘后恢復(fù)腎臟血流，并于再灌注30分鐘，1小時(shí)，3小時(shí)，6小時(shí)，12小時(shí)，24小時(shí)后分別處死動(dòng)物，苦昧酸法檢測(cè)血清肌酐、

2、ELISA法檢測(cè)血清及腎組織中AngII含量，并行光鏡及電鏡觀察腎組織形態(tài)學(xué)損傷。 (2)根據(jù)電鏡結(jié)果在足細(xì)胞損傷最嚴(yán)重時(shí)間點(diǎn)加用AngII的1型受體阻斷劑(ARB)氯沙坦灌胃治療，檢測(cè)。腎功能、電鏡觀察腎組織足細(xì)胞損傷、免疫熒光及Westernblot檢測(cè)腎組織nephrin、podocin表達(dá)，同假手術(shù)組，缺血組，缺血再灌注組比較，觀察上述指標(biāo)變化。 (3)體外培養(yǎng)人腎小球足細(xì)胞，觀察其生長(zhǎng)特點(diǎn)并經(jīng)間接免疫熒光法檢測(cè)

3、細(xì)胞上nephrin、podocin的表達(dá)。通過(guò)在培養(yǎng)箱中通入高濃度氮?dú)庵谱骷?xì)胞缺氧復(fù)氧模型，ELISA法檢測(cè)細(xì)胞上清液中AngII含量變化。 (4)模擬缺血再灌注模型體內(nèi)環(huán)境變化，直接在足細(xì)胞培養(yǎng)基中加入AngII刺激，并分別給予ARB及蛋白激酶C抑制劑(PKCI)干預(yù)，觀察各組細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變，Westernblot檢測(cè)足細(xì)胞PKC活性變化，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞nephrin、podocin表達(dá)。 結(jié)論: 腎臟缺