HMGB1誘導大鼠胰腺腺泡細胞JAK2-STAT3信號通路活化的研究.pdf

1、目的:研究晚期炎性因子HMGB1是否通過JAK/STAT信號通路誘導大鼠胰腺腺泡細胞早期炎性因子TNF-α、IL-1、IL-6的釋放，初步探討HMGB1在急性重癥胰腺炎病程中促使炎性反應加重的機制，為臨床預防、治療SAP，減少并發(fā)癥提供新的思路。
　　 方法:將32只SD大鼠處死后，取胰腺分離胰腺腺泡細胞，將所得細胞懸液等分為4組，①A組:正常對照組②B組:促進組（HMGB1組），在胰腺腺泡細胞中加入HMGB1（終濃度1μ g/

2、mL）③C組:抑制組1（JAK2抑制劑-AG490組），AG490(終濃度25μmol/L)于HMGB1誘導前30min加入培養(yǎng)細胞④D組:抑制組2（STAT3抑制劑-雷帕霉素）（RPM）組，RPM（終濃度40ng/ml）于HMGB1誘導前30min加入培養(yǎng)細胞。每大組按HMGB1分別干預10min、30min、60min、120min、3h、6h、12h、24h分為8個亞組，每亞組1.5ml。分別于上述時間點采樣，實時定量逆轉錄聚合酶

3、鏈反應(RT-PCR)和蛋白印跡法(Western-blot)檢測10min、30min、60min、120min時間點細胞中JAK2、STAT3mRNA表達及60min、120min時間點JAK2、STAT3蛋白表達;酶聯(lián)接免疫吸附劑(ELISA)測定3h、6h、12h、24h時間點上層液中TNF-α、IL-1、IL-6因子的表達。并對各組檢測指標作統(tǒng)計學分析。
　　 結果:與A組比較，B組各時間點JAK2 mRNA及30mi

4、n、60min、120min時間點STAT3mRNA的相對表達量升高，60min、120min時間點JAK2、STAT3蛋白表達升高，有顯著統(tǒng)計學意義(P＜0.01);且在HMGB1刺激下，JAK2 mRNA10min活化其相對表達量升高，60min達高峰，STAT3 mRNA逐漸活化，30min相對表達量升高，60min達高峰;3h、6h、12h時間點TNF-α及3h、6h、12h、24h時間點IL-1、IL-6因子的表達明顯升高(P

5、＜0.01);TNF-α釋放在3h即升高，6h達高峰，12h維持較高水平，24h降至正常;IL-1釋放在3h即開始上升，6h、12h一直維持高水平，至24h達高峰;IL-6于3h達高峰，6h、12h一直處于高水平，24h有所下降。與B組比較，C組、D組各個時間點JAK2 mRNA的相對表達量及30min、60min、120min時間點STAT3 mRNA的相對表達量下降，有統(tǒng)計學意義(P＜0.05，P＜0.01);60min、120mi

6、n JAK2、STAT3蛋白相對表達量顯著降低(P＜0.01);3h、6h、12h時間點TNF-α及3h、6h、12h、24h時間點IL-1、IL-6因子的表達降低（P＜0.05，P＜0.01）。C組、D組之間比較各時間點JAK2、STAT3 mRNA和蛋白及TNF-α、IL-1、IL-6因子的表達無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　 結論:HMGB1可直接誘導胰腺腺泡細胞JAK2/STAT3信號通路的活化及TNF-α、IL-1