宮頸磷癌中p16基因擴(kuò)增或缺失及eIF4E基因的表達(dá).pdf

1、[目的]
　　 檢測(cè)p16的3個(gè)外顯子在宮頸鱗癌中擴(kuò)增與丟失情況。并檢測(cè)相應(yīng)宮頸組織標(biāo)本中p16在宮頸鱗癌中的蛋白表達(dá)情況。探討p16在宮頸鱗癌中異常表達(dá)的可能機(jī)制。檢測(cè)eIF4E在正常宮頸上皮、宮頸上皮內(nèi)瘤樣變(CIN)、宮頸鱗癌(SCC)中的表達(dá),探討eIF4E在宮頸癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的意義和作用。
　　 [方法]
　　 對(duì)32例宮頸鱗狀細(xì)胞癌石蠟標(biāo)本進(jìn)行切片和脫蠟,均用蘇木素輕染色,在顯微鏡下找準(zhǔn)正常組織(間

2、質(zhì))和癌組織的部位,進(jìn)行顯微切割,分別取癌旁正常細(xì)胞和癌細(xì)胞,用商用試劑盒提取DNA。以p16的3個(gè)外顯子的基因序列為模板設(shè)計(jì)引物,在反應(yīng)體系中加入內(nèi)參照GAPDH和目的引物進(jìn)行雙重PCR擴(kuò)增檢測(cè)。運(yùn)用Imago J軟件對(duì)宮頸癌組織和癌旁間質(zhì)組織PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的電泳條帶進(jìn)行灰度分析,以二者的相對(duì)光密度值之比≥1.5倍為擴(kuò)增、≤0.5倍為缺失的評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)32例標(biāo)本中p16的3個(gè)外顯子擴(kuò)增或丟失。應(yīng)用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)32例宮頸鱗狀細(xì)

3、胞癌標(biāo)本中p16的表達(dá)情況。按細(xì)胞著色情況將宮頸鱗狀細(xì)胞癌中陽(yáng)性病例分為低表達(dá)組和高表達(dá)組,然后分析p16低表達(dá)組和高表達(dá)組中,p16各外顯子中擴(kuò)增或丟失的情況。應(yīng)用免疫組化SP法檢測(cè)79例宮頸病變中e IF4E的表達(dá)情況,其中包括10例慢性宮頸炎,22例CINⅠ級(jí),24例CINⅡ/CINⅢ,23例宮頸鱗狀細(xì)胞癌。
　　 [結(jié)果]
　　 在32例宮頸鱗癌病變組織中,p16基因的第1、2、3外顯子擴(kuò)增率分別為28.1％(9

4、732)、15.6%(5/32)、28.1%(9/32)。P16基因的第1、2、3外顯子缺失率分別為34.4%(11/32)、21.8%(7/32)、15.6%(5/32)。具有一個(gè)以上外顯子發(fā)生擴(kuò)增或缺失改變?yōu)?1.3%(26/32)。免疫組化結(jié)果顯示:32例宮頸鱗癌病變組織中,p16陽(yáng)性表達(dá)率為100%(32/32),其中高表達(dá)組65.6%(21/32),低表達(dá)組34.4%(11/32)。低表達(dá)組中,p16各外顯子表現(xiàn)為擴(kuò)增的分別為

5、:27.3%(3/11)、9%q(1/11)、18.2%(2/11);高表達(dá)組中,p16各外顯子表現(xiàn)為擴(kuò)增的分別為:28.6%(6/21)、19%(4/21)、33.3%(7/21),p16各外顯子發(fā)生擴(kuò)增在高表達(dá)組和低表達(dá)組之間比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Fisher確切概率法,p＞0.05)。低表達(dá)組中,p16各外顯子表現(xiàn)為缺失的分別為:27.3%(3/11)、9%(1/11)、18.2%(2/11);高表達(dá)組中,p16各外顯子表現(xiàn)為缺

6、失的分別為:38.1%(8/21)、28.6%(6/21)、14.3%(3/21)。16各外顯子發(fā)生缺失在低表達(dá)組和高表達(dá)組之間比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Fisher確切概率法,p＞0.05)。免疫組化結(jié)果:按上述病例標(biāo)本順序(依次是宮頸炎、C1NⅠ、CINⅡ/Ⅲ、浸潤(rùn)癌),石蠟標(biāo)本eIF4E中表達(dá)陽(yáng)性率分別是0(0/10),22.7%(5/22),67.7%(16/24),87%(20/23),除了CINⅡ/Ⅲ和浸潤(rùn)癌組的eIF4E陽(yáng)性

7、表達(dá)差別無(wú)顯著性外(x2檢驗(yàn),P＞0.05),其余各組與宮頸鱗癌表達(dá)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2檢驗(yàn),P＜0.05)。
　　 [結(jié)論]
　　 1.p16各外顯子在宮頸鱗癌中的基因改變既有擴(kuò)增又有缺失。本實(shí)驗(yàn)中由于病例數(shù)的限制,未能提供確切的證據(jù)表明p16各外顯子的擴(kuò)增或缺失與p16蛋白表達(dá)的直接關(guān)系,還需進(jìn)一步研究。
　　 2.81.3%病例(26/32)具有一個(gè)以上外顯子擴(kuò)增或丟失,提示p16基因水平的改變與宮頸癌