Pax4協(xié)同Pdx1、MafA、Ngn3促進人臍帶間充質(zhì)干細胞向胰島素陽性細胞的分化.pdf

1、【目的】采用基因重編程的方法探討體外條件下轉(zhuǎn)錄因子Pax4對Pdx1、MafA及Ngn3共同體誘導人臍帶間充質(zhì)干細胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,HuMSCs)向胰島素陽性細胞分化的協(xié)同作用及可能機制,以獲取足夠用于移植的胰島素陽性細胞。
　　【材料與方法】采用差異貼壁法分離、培養(yǎng)、擴增出人臍帶間充質(zhì)干細胞,用構(gòu)建的含Pdx1、MafA及Ngn3三基因重組腺病毒載體(Ad

2、-3F)和Ad-Pxa4腺病毒載體分別及聯(lián)合誘導人臍帶間充質(zhì)干細胞,細胞免疫組織化學法檢測誘導后細胞中胰島素、胰高血糖素及C-肽的表達;qRT-PCR檢測誘導后細胞中GCG和胰島素基因及多種相關(guān)內(nèi)源性因子的表達情況;ELISA方法檢測誘導后細胞對葡萄糖刺激的敏感性程度及分泌胰島素量的情況。
　　【結(jié)果】
　?、偌毎庖呓M織化學法檢測結(jié)果表明在Pax4因子的協(xié)同作用下,誘導4天后的人臍帶間充質(zhì)干細胞表達胰島素、胰高血糖素素及C

3、-肽量均增加。
　?、趒RT-PCR結(jié)果表明病毒的感染復數(shù)為50時,4個轉(zhuǎn)錄因子共同誘導的細胞胰高血糖素基因表達較Ad-3F誘導的細胞胰高血糖素基因表達有下降且有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　③在Pax4因子協(xié)同作用下誘導后的細胞表達β細胞成熟過程的重要內(nèi)源性轉(zhuǎn)錄因子,且表達得到上調(diào)。
　　④高濃度葡萄糖刺激下,Pax4協(xié)同下誘導的細胞分泌胰島素量較Ad-3F誘導的細胞分泌量增加,且有明顯統(tǒng)計學意義(P<0.01)